[发明专利]黄瓜绿斑驳花叶病毒基因间隔区域在抗性烟草培育中的应用

权利要求书

1.黄瓜绿斑驳花叶病毒间隔区域基因片段，其特征在于：是如下方案之一：

方案一：片段IR1，是CGMMV间隔区域5′端345bp区段，碱基序列如SEQ ID NO.1所示；

方案二：片段IR2，是CGMMV间隔区域中端368bp区段，碱基序列如SEQ ID NO.2所示；

方案三：片段IR3，是CGMMV间隔区域3′端366bp区段，碱基序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的基因片段在CGMMV基因介导烟草抗性中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述烟草是本氏烟（Nicotiana benthamiana）。

4.烟草干涉表达载体，其特征在于：包含权利要求1所述任一黄瓜绿斑驳花叶病毒间隔区域基因片段。

5.根据权利要求4所述的烟草干涉表达载体，其特征在于：是具有发夹结构的反向重复序列载体ihpRNAi。

6.根据权利要求5所述的烟草干涉表达载体，其特征在于：回收纯化的所述黄瓜绿斑驳花叶病毒间隔区域基因片段PCR产物与干涉载体pHellsgate2进行BP重组反应构建。

7.重组质粒，其特征在于：包含权利要求1所述任一黄瓜绿斑驳花叶病毒间隔区域基因片段。

8.利用黄瓜绿斑驳花叶病毒基因组间隔区域片段培育抗性烟草的方法，其特征在于：依如下步骤实施：

首先，根据CGMMV目的片段设计PCR扩增引物对，经PCR扩增后回收纯化得到各PCR产物，所述目的片段是SEQ ID NO.1序列所示片段IR1或SEQ ID NO.2序列所示片段IR2或SEQ IDNO.3序列所示片段IR3；

其次，将各PCR产物与干涉载体pHellsgate2进行重组反应，重组产物转化大肠杆菌DH5α，提取质粒，筛选序列正确的阳性重组质粒；

再次，各阳性重组质粒转化农杆菌筛选含阳性ihpRNAi的农杆菌；

最后，用含阳性ihpRNAi的农杆菌转化烟草。

9.根据权利要求8所述的培育抗性烟草的方法，其特征在于：所述烟草是本氏烟（Nicotiana benthamiana）。