[发明专利]重组抗体及其应用

说明书

本发明提出了一种重组抗体及其应用，该重组抗体含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95％同一性的氨基酸序列：CD16抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:1～6；B7H6抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:7～12。本发明所制备的重组抗体能同时靶向CD16和B7H6，且半衰期得到显著延长，较单靶抗体表现出更强的肿瘤抑制能力。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地，涉及重组抗体及其应用，更具体地，涉及重组抗体、免疫细胞、核酸、表达载体、重组细胞、组合物、上述物质在制备药物中的用途、试剂盒。

背景技术

B7H6是属于B7家族的I型跨膜蛋白，它包含了2个免疫球蛋白结构域。B7H6也是NK细胞活化性受体NKp30的配体。B7H6在多种肿瘤细胞上均有表达，但是在人的正常组织和健康外周血单核细胞并没有检测到B7H6的mRNA。在炎症环境中，一些促炎性细胞因子如IL-1β和TNF可以刺激CD14+和CD16+单核细胞和中性粒细胞上调表达B7H6。B7H6的肿瘤表达谱非常广泛，这包括白血病、淋巴瘤、结直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌和肝癌等。B7H6的表达与一些癌症的转移也存在关联，但是在多数肿瘤中B7H6的作用目前还不清楚。目前，尽管B7H6在多种肿瘤中表达，但是针对这一分子的肿瘤治疗手段并不多。有研究者开发了针对B7H6的双特异性抗体，它的构建形式是BiTE，这种形式不含有天然抗体的恒定区，因此也决定了这种分子在体内的半衰期很短，很大程度上限制了其使用。

自然杀伤细胞(natural killer cells，NK细胞)是组成固有免疫系统的重要成员，与T细胞不同的是，NK细胞并不表达抗原特异性受体。NK细胞本身具有广谱的肿瘤杀伤能力，在增强抗体和T细胞应答中也起到了重要作用。目前，基于NK细胞的肿瘤免疫治疗形式多样，采用的手段也不尽相同。CD16分子是NK细胞表面重要标志，它可以激活IgE NK细胞受体(FcεRIγ)和CD3ζ的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)发生ADCC作用。因此，CD16靶点在基于NK细胞再导向的双特异性抗体中被优先选择。

目前在临床和在研发阶段的B7H6双特异性抗体均为基于T细胞开发的，还没有基于NK细胞开发的B7H6双特异性抗体。研究发现T细胞再导向类型的双特异性抗体可以活化T细胞使之释放肿瘤坏死因子(TNF)，TNF可以活化单核细胞产生IL-6和IL-1β等炎性细胞因子，最终导致临床出现高热等不良反应，这也是目前很多双特异性抗体在临床由于副作用被终止的原因。NK细胞相比T细胞其杀伤能力更强，但分泌细胞因子的水平更低，因此在临床不良事件发生的频率也更低，因此，开发靶向性强的双特异性抗体对肿瘤的预防及治疗具有极大的价值。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

本发明中，发明人对CD16、B7H6抗原结合片段进行组合和筛选，设计了重组双特异性抗体，所述重组双特异性抗体可以特异性结合CD16和B7H6，进而靶向性地将B7H6分子带入到肿瘤细胞附近，通过与肿瘤细胞上的B7H6分子结合促使CD16+的淋巴细胞与肿瘤细胞形成免疫突触，从而使淋巴细胞活化杀伤B7H6+的肿瘤细胞，所述重组双特异性抗体具有较高的CD16和B7H6结合活性，较长的体内半衰期，且抗肿瘤活性较高。

因此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种重组抗体。根据本发明的实施例，含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95％同一性的氨基酸序列：CD16抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:1～6；B7H6抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:7～12。根据本发明实施例的重组抗体可以有效与CD16、B7H6进行结合，具有较强的体内、外结合活性，以及较长的体内半衰期，抗肿瘤效果显著。

GGHNIGSKNVH(SEQ ID NO:1)。

QDNKRPS(SEQ ID NO:2)。

QVWDNYSVL(SEQ ID NO:3)。