[发明专利]双特异性抗体及其应用

说明书

本发明提出了一种双特异性抗体及其应用，该重组抗体含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95％同一性的氨基酸序列：CD3抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:1～6；B7H6抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:7～12。本发明所制备的重组抗体能同时靶向CD3和B7H6，且半衰期得到显著延长，较单靶抗体表现出更强的肿瘤抑制能力。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地，涉及双特异性抗体及其应用，更具体地，涉及重组抗体、免疫细胞、核酸、表达载体、重组细胞、组合物、上述物质在制备药物中的用途、试剂盒。

背景技术

双特异性抗体是可同时特异性结合两个抗原位点的抗体。用于肿瘤治疗的双特异性抗体按照其作用机制可以分为三类：再导向效应细胞；免疫调节；靶向肿瘤细胞受体双重结合。其中，用于再导向功能的抗体在其中占据大多数，目前已经上市的两个用于肿瘤治疗的抗体也是基于T细胞再导向。根据双特异性抗体的特性，它也可以很好的运用于其他治疗体系中，例如双重免疫调节或者靶向同一细胞膜的两个分子。

B7H6是属于B7家族的I型跨膜蛋白，它包含了2个免疫球蛋白结构域。B7H6也是NK细胞活化性受体NKp30的配体。B7H6在多种肿瘤细胞上均有表达，但是在人的正常组织和健康外周血单核细胞并没有检测到B7H6的mRNA。在炎症环境中，一些促炎性细胞因子如IL-1β和TNF可以刺激CD14+和CD16+单核细胞和中性粒细胞上调表达B7H6。B7H6的肿瘤表达谱非常广泛，这包括白血病、淋巴瘤、结直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌和肝癌等。B7H6的表达与一些癌症的转移也存在关联，但是在多数肿瘤中B7H6的作用目前还不清楚。目前，尽管B7H6在多种肿瘤中表达，但是针对这一分子的肿瘤治疗手段并不多。有研究者开发了针对B7H6的双特异性抗体，它的构建形式是BiTE，这种形式不含有天然抗体的恒定区，因此也决定了这种分子在体内的半衰期很短，很大程度上限制了其使用。

在基于T细胞再导向的双特异性抗体中，CD3这个靶点非常重要。与免疫卡控点阻断抗体不同的是，CD3相关的双特异性抗体可以越过TCR和肽-主要组织相容性复合物(pMHC)来介导T细胞活化，但在突触中的分子发挥作用过程与经典TCR-pMHC相互作用很相似。双特异性抗体的活性受CD3亲和力的影响，CD3高亲和力双特异性抗体在体外实验中有着更好的促杀伤效果，但是在体内存在致命的细胞因子释放综合征毒性，这与嵌合抗原受体(CAR)T细胞毒性非常相似。同时有研究发现非常低亲和力的CD3抗体序列在构建双特异性抗体后也可以有效地刺激T细胞活化。当CD3抗体亲和力在合适范围(200±78nM)且肿瘤靶点相关抗体是高亲和力时，双特异性抗体会促使T细胞选择性地定位到肿瘤局部而不是在外周循环，避免全身活化。因此，开发靶向性强的双特异性抗体对肿瘤的预防及治疗具有极大的价值。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

本发明中，发明人对CD3、B7H6抗原结合片段进行多种组合和筛选，设计了重组双特异性抗体，所述重组双特异性重组抗体可以特异性结合CD3和特异性结合B7H6，进而靶向性地将B7H6分子带入到肿瘤细胞附近，通过与肿瘤细胞上的B7H6分子结合促使CD3+的淋巴细胞与肿瘤细胞形成免疫突触，从而使淋巴细胞活化杀伤B7H6+的肿瘤细胞，所述重组双特异性抗体具有较高的CD3和B7H6结合活性，且抗肿瘤活性较高。

因此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种重组抗体。根据本发明的实施例，含有选自下列至少之一的CDR序列或与其具有至少95％同一性的氨基酸序列：CD3抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:1～6；B7H6抗体可变区CDR序列：SEQ ID NO:7～12。根据本发明实施例的重组抗体可以有效与CD3、B7H6进行结合，具有较强的体内、外结合活性，以及较长的体内半衰期，抗肿瘤效果显著。

RASQDIRNYLN(SEQ ID NO:1)。

YTSRLES(SEQ ID NO:2)。