[发明专利]sgRNA、质粒、IRF7功能缺失的细胞系及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种用于特异性靶向IRF7基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.一种CRISPR/Cas9敲除IRF7基因的质粒，其特征在于，所述质粒含有sgRNA，所述如sgRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求2所述的CRISPR/Cas9敲除IRF7基因的质粒，其特征在于，所述质粒由所述sgRNA和pX459载体连接得到。

4.一种IRF7功能缺失的细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：构建如权利要求3或4所述的质粒；

步骤2：将所述质粒转染至宿主细胞，得到转染细胞；

步骤3：将转染细胞培养筛选得到IRF7功能缺失的细胞系；

所述宿主细胞为DF-1细胞。

5.根据权利要求4所述的IRF7功能缺失的细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤1具体为：

步骤11：构建两端加上酶切位点的sgRNA，得到引物；

步骤12：将引物磷酸化修饰和退火；

步骤13：将通过Bbsl酶切的pX459载体与引物连接，并转化进入到转化DH5α感受态细菌；

步骤14：挑取步骤13转化得到的细菌进行单克隆细菌扩增培养，分离得到质粒pX459-sgIRF7。

6.根据权利要求5所述的IRF7功能缺失的细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤2具体为：

用质粒pX459-sgIRF7转染DF-1细胞；

所述步骤3具体为：

转染后的DF-1细胞培养一段时间后在培养皿内加入嘌呤霉素使其终浓度为5μg/ml，并坚持每3天用含5μg/ml的嘌呤霉素的细胞培养液更换一次，10天后改为用不含嘌呤霉素的细胞培养液每5天更换一次，直到有明显的细胞群落出现，经筛选得到IRF7功能缺失的细胞系。

7.根据权利要求6所述的IRF7功能缺失的细胞系的构建方法，其特征在于，所述转染为阳离子脂质体介导的转染。

8.一种IRF7功能缺失的DF-1细胞系，其特征在于，所述DF-1细胞系表达突变型IRF7，所述突变型IRF7的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述DF-1细胞系含有编码所述突变型IRF7的如SEQ ID NO.4所示的核苷酸。

9.权利要求8所述的DF-1细胞系在以下至少之一中的应用：干扰素及其调控基因的全功能研究；病原微生物复制、调控、致病机制研究；抗病药物筛选。