[发明专利]仔猪副伤寒弱毒菌发酵培养物、活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S11一级种子的培养：将仔猪副伤寒弱毒菌接种于血平板上，在36～37℃下厌氧培养18～22h，得到生长有仔猪副伤寒弱毒菌一级种子的血平板；

S12二级种子的培养：从步骤S11得到的生长有仔猪副伤寒弱毒菌一级种子的血平板上，挑选出圆形、细小、半透明、光滑、湿润、圆整的单菌落，将其接种于培养基中，在36～37℃下培养18～22h，得到生长有仔猪副伤寒弱毒菌二级种子的培养液；

S13发酵培养：在发酵罐中依次加入培养基和消泡剂，高压高温灭菌后降温，再将步骤S12制备的培养液接种到发酵罐内，培养即得；

其中，所述步骤S12和S13中的培养基包括以下质量浓度组分：酵母浸粉0.018-0.025％，牛肉浸粉0.018-0.025％，蛋白胨0.018-0.025％，葡萄糖0.005-0.01％，氯化钠0.001-0.003％，磷酸氢二钾0.002-0.005％。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S13中的培养具体为：初始时将发酵罐内溶液pH调节为6.7～7.3，持续通入无菌空气，培养时每隔一定时间检测一次pH，当pH值上升至7.8时，添加40％葡萄糖溶液调整pH至7.0～7.3，培养时间为18-22h，培养温度为36～37℃。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述持续通入无菌空气具体为：接种后先以3～5L/h的流量通入无菌空气2h，之后增加流量至8～10L/h通入无菌空气3h，之后增加流量至20～25L/h通入无菌空气3h，之后增加流量至50～60L/h通入无菌空气4h，之后增加流量至70～80L/h通入无菌空气4h，之后增加流量至100～120L/h通入无菌空气直至培养结束。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S13中发酵罐内培养基、消泡剂、培养液的体积比为：100：(0.01～0.02)：(1～3)。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S12和S13中的培养基包括以下质量浓度组分：酵母浸粉0.023％，牛肉浸粉0.022％，蛋白胨0.021％，葡萄糖0.01％，氯化钠0.002％，磷酸氢二钾0.003％，且培养基的pH为6.4-7.0。

6.一种采用权利要求1至5任一所述制备方法制备的仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物。

7.一种权利要求6所述的仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物在制备用于预防由沙门氏菌引起的相关疾病的药物或疫苗中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述相关疾病包括坏死性肠炎、顽固下痢、败血症的任一种或其组合。

9.一种采用权利要求6所述的仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物制备的活疫苗。

10.一种权利要求9所述的活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S21向权利要求6所述的发酵培养物中加入明胶蔗糖冻干保护剂，充分混合，其中发酵培养物与明胶蔗糖冻干保护剂的体积比为7：1，混合后明胶和蔗糖的体积百分比含量分别为1.5％和5％，得到混合液

S22将步骤S21得到的混合液分装，依次经过-50℃预冻、-5℃一次升华、解析升华三个阶段干燥，干燥结束依次压塞、放气，完成冻干程序即得。