[发明专利]仔猪副伤寒弱毒菌发酵培养物、活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开一种仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物、活疫苗及其制备方法，发酵培养物的制备方法包括如下步骤：一级种子的培养：将仔猪副伤寒弱毒菌接种于血平板上，在36～37℃下厌氧培养18～22h；二级种子的培养：从生长有仔猪副伤寒弱毒菌一级种子的血平板上，挑选出圆形、细小、半透明、光滑、湿润、圆整的单菌落，将其接种于培养基中，在36～37℃下培养18～22h，得到生长有仔猪副伤寒弱毒菌二级种子的培养液；发酵培养：在发酵罐中依次加入培养基和消泡剂，高压高温灭菌后降温，再将步骤S12制备的培养液接种到发酵罐内，培养即得。本发明发酵培养物活菌数可达到400‑450CFU/ml(×10⁸)，冻干成活率达70％以上，制品安全性更可靠，具有极好的产业应用价值。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物、活疫苗及其制备方法。

背景技术

仔猪副伤寒(Necrotic enteritis)也叫沙门氏菌病，是一种由沙门氏菌引起的传染病，在临床可分慢性和急性两型，慢性型引发坏死性肠炎、顽固下痢，急性型引发败血症，主要发病于出生6个月以内的仔猪，2-4月仔猪尤为多见，而一旦发病整个猪场将面临巨大损失。

为预防仔猪副伤寒，需对仔猪副伤寒弱毒菌进行发酵培养得到活菌数多的发酵菌液，并发酵菌液制备相关的药物和疫苗，其中仔猪副伤寒弱毒菌株是将猪霍乱沙门氏菌强毒株C87-1通过化学方法致弱后得到的C500弱毒菌株。

大量稳定繁殖生长仔猪副伤寒弱毒菌是制备高质量仔猪副伤寒弱毒活疫苗和药物的关键所在。现有技术中，一般使用牛肉浸液肉汤培养基培养仔猪副伤寒弱毒菌株，配制这种培养基工序多，耗费时间、人物力，需要购置大量牛肉，而市面上牛肉多是饲料喂养的肉牛，生长周期短，制备出的培养基营养成分不充足，常规的培养方法也难以实现仔猪副伤寒弱毒菌高密度培养，使得发酵菌液活菌数少，冻干后产品头份不够或者出现安全性问题，最终影响疫苗产品的质量。

因此，十分有必要开发一种有助于仔猪副伤寒弱毒菌高密度繁殖的培养方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物、活疫苗及其制备方法，以解决现有技术中存在的一般使用牛肉浸液肉汤培养基培养仔猪副伤寒弱毒菌株，配制这种培养基工序多，耗费时间、人物力，需要购置大量牛肉，而市面上牛肉多是饲料喂养的肉牛，生长周期短，制备出的培养基营养成分不充足，常规的培养方法也难以实现仔猪副伤寒弱毒菌高密度培养，使得发酵菌液活菌数少，冻干后产品头份不够或者出现安全性问题，最终影响疫苗产品的质量的技术问题。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

本发明第一方面提供了一种仔猪副伤寒弱毒菌的发酵培养物的制备方法，包括如下步骤：

S11一级种子的培养：将仔猪副伤寒弱毒菌接种于血平板上，在36～37℃下厌氧培养18～22h，得到生长有仔猪副伤寒弱毒菌一级种子的血平板；

S12二级种子的培养：从步骤S11得到的生长有仔猪副伤寒弱毒菌一级种子的血平板上，挑选出圆形、细小、半透明、光滑、湿润、圆整的单菌落，将其接种于培养基中，在36～37℃下培养18～22h，得到生长有仔猪副伤寒弱毒菌二级种子的培养液；

S13发酵培养：在发酵罐中依次加入培养基和消泡剂，高压高温灭菌后降温，再将步骤S12制备的培养液接种到发酵罐内，培养即得；

其中，所述步骤S12和S13中的培养基包括以下质量浓度组分：酵母浸粉0.018-0.025％，牛肉浸粉0.018-0.025％，蛋白胨0.018-0.025％，葡萄糖0.005-0.01％，氯化钠0.001-0.003％，磷酸氢二钾0.002-0.005％。