[发明专利]生产尿嘧啶糖基化酶的方法及用于该方法的双载体系统

说明书

本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种生产尿嘧啶糖基化酶(UDG)的方法及用于该方法的双载体系统。该方法可以显著提高了UDG的溶解性，从而增加UDG的表达量和产量，同时保证了UDG的活性、稳定性和纯度。

技术领域

本发明的涉及生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种生产尿嘧啶糖基化酶的方法及用于该方法的双载体系统。

背景技术

尿嘧啶糖基化酶(UDG)是一种特异性降解含尿嘧啶碱基DNA的水解酶，主要用于PCR残留污染的控制。依据UDG蛋白的热稳定性分为耐热型UDG和热敏型UDG(不耐热)。耐热型UDG由于热稳定好，使用过程中很难彻底被热灭活，因此会影响下游检测技术(如qPCR、多重PCR、体外诊断试剂盒等)的灵敏度。因此，热敏型UDG更加适合兼容到qPCR等高灵敏度检测技术中。

目前热敏UDG主要起源于嗜冷海洋生物，如大西洋鳕鱼和南极细菌，来源于这些海洋生物的UDG的耐热性能差，其在表达过程中易形成包涵体而导致溶解度较低，而在纯化过程中易降低活性和丢失活性，最终导致UDG的产量较低。因此，UDG基因的挖掘、表达载体的构建方式、表达和纯化工艺都是开发该酶的技术难点。

因此，本领域亟需一种UDG的生产方法，该方法可以显著提高UDG的溶解性，增加UDG的表达量和产量，同时保证UDG的活性、稳定性和纯度。

发明内容

如上所述，现有的UDG生产方法，由于UDG在表达过程中溶解度较低，而在纯化过程中又易活性降低和活性丢失，最终导致UDG的产量较低。因此，本领域亟需一种UDG的生产方法，该方法可以显著提高了UDG的溶解性，从而增加UDG的表达量和产量，同时保证UDG的活性、稳定性和纯度。

有鉴于此，在第一方面，本发明提供了一种生产尿嘧啶糖基化酶(UDG)的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供一种表达细胞，所述表达细胞包含能够表达所述UDG的第一载体和能够表达分子伴侣素系统GroEL-GroES的第二载体，其中，所述UDG的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，并且所述GroEL和GroES的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示；

b)在第一诱导条件下诱导所述表达细胞表达所述分子伴侣素系统GroEL-GroES；

c)在第二诱导条件下诱导所述表达细胞同时表达所述分子伴侣素系统GroEL-GroES和所述UDG。

在第二方面，本发明提供了一种双载体系统，所述双载体系统包含：

(1)第一载体，所述第一载体能够表达尿嘧啶糖基化酶(UDG)，所述UDG的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；以及

(2)第二载体，所述第二载体能够表达分子伴侣素系统GroEL-GroES，所述GroEL和GroES的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。

在第三方面，本发明提供了一种表达细胞，所述表达细胞包含本发明第二方面的双载体系统。

在第四方面，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含：本发明第三方面的表达细胞、以及用于指导如何利用该试剂盒来生产尿嘧啶糖基化酶(UDG)的说明书。

本发明的有益效果包括以下一个或者多个：

1)提供了一种生产尿嘧啶糖基化酶(UDG)的方法，该方法可以显著提高UDG的溶解性，从而增加UDG的表达量和产量；

2)提供了一种可用于生产易受温度影响的热敏型UDG的方法，通过低温诱导和低温纯化保证了热敏型UDG的活性和稳定性；

附图说明