[发明专利]基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白、疫苗及其制备方法与用途

说明书

本发明涉及一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白、疫苗及其制备方法与用途，由外源蛋白和多效生长因子融合形成的融合蛋白TRX‑PTN；利用此融合蛋白TRX‑PTN，打破机体免疫耐受，产生抗多效生长因子的抗体，启动免疫反应，中和肿瘤中的多效生长因子。使得肿瘤生长得到抑制，同时可以促使肿瘤血管正常化，提高药物递送效率，降低副作用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于多效生长因子的神经胶质母 细胞瘤治疗性疫苗及其制备方法与用途。

背景技术

多效生长因子(Pleiotrophin，PTN)是分泌性肝素结合细胞因子，由136 个氨基酸组成。PTN基因在小鼠发育的神经系统中有大量表达，在出生前后达 到高峰，之后逐渐降低。在成体中几乎检测不到PTN的表达。但是，PTN在乳 腺癌，肺癌，黑色素瘤，胰腺癌，前列腺癌等多种肿瘤中高表达。PTN可以通 过诱导肿瘤血管生成或改变肿瘤微环境而间接促进肿瘤生长，也可以通过诱导 肿瘤细胞分裂或引发细胞上皮间叶转换(EMT)而直接促进肿瘤的生长与浸润。 发明人此前研究表明，PTN在神经胶质瘤中异常高表达，其表达量与病人整体 生存率成负相关。使用慢病毒在GL261小鼠神经胶质瘤细胞中过表达PTN，发 现PTN可以显著促进肿瘤生长，诱导肿瘤血管异常化。使用小干扰RNA下调 PTN表达，则可以显著抑制原位CT2A神经胶质母细胞瘤生长。与此同时，与 世界知名神经胶质瘤专家Eric Holland教授团队合作，发明人发现在RCAS-Tva 小鼠胶质瘤模型中，PTN通过促进神经胶质瘤干细胞(Glioma stem cell)的细 胞分裂，显著增加肿瘤发生概率。PTN在正常组织中不表达，而在肿瘤组织中 表达，并且PTN可以从多方面促进神经胶质母细胞瘤生长，因此，PTN作为靶 点治疗神经胶质母细胞瘤将大大增加特异性，降低副作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗 性融合蛋白、疫苗及其制备方法与用途。

本发明的技术方案是提供一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤 治疗性融合蛋白，其特殊之处在于：由外源蛋白和多效生长因子融合形成的融 合蛋白TRX-PTN；利用此融合蛋白TRX-PTN，打破机体免疫耐受，产生抗多 效生长因子(Pleiotrophin，PTN)的抗体。

进一步地，上述外源蛋白为来自于大肠杆菌的TRX：Bacterial thioredoxin。

进一步地，融合蛋白由pET21a原核载体表达系统表达，利用融合蛋白C端 的His标签进行镍柱纯化。

进一步地，融合蛋白TRX-PTN的氨基酸序列如下：

本发明还提供一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性疫苗， 其特殊之处在于：含有上述基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性 融合蛋白，将该疫苗简称为融合蛋白TRX-PTN疫苗。

本发明还提供一种基于多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白 或疫苗在制备治疗神经胶质母细胞瘤产品方面的应用。

进一步地，基于多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白或疫苗 在制备促进神经胶质母细胞瘤血管正常化产品中的应用。

进一步地，基于多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白或疫苗 在制备减低神经胶质母细胞瘤肿瘤血管密度产品中的应用。

进一步地，基于多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白或疫苗 在制备抑制神经胶质母细胞瘤血管生成产品中的应用。

本发明还提供一种基于多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合蛋白 或疫苗与替莫唑胺联用在制备治疗神经胶质母细胞瘤产品方面的应用。

本发明还提供一种基于靶向多效生长因子的神经胶质母细胞瘤治疗性融合 蛋白的制备方法，其特殊之处在于，包括以下步骤：