[发明专利]一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法有效
申请号: | 202111500407.7 | 申请日: | 2021-12-09 |
公开(公告)号: | CN114181938B | 公开(公告)日: | 2022-11-15 |
发明(设计)人: | 谭志坚;王瑞珍;周德荣;林瑞庆;翁亚彪;陆肖;蔡晓懿;邝春曼;黄仪娟 | 申请(专利权)人: | 佛山市正典生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12N9/22;C12N15/12;C12N15/65;C12N15/85;C12N15/90;C12Q1/686;G01N21/64 |
代理公司: | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人: | 潘登 |
地址: | 528138 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 表达 r7 蛋白 荧光 标签 重组 载体 及其 检测 方法 | ||
1.一种ETH_00009555基因编辑系统,其特征在于,所述ETH_00009555基因编辑系统包括基因编辑质粒和同源重组片段;
所述基因编辑质粒包括靶向ETH_00009555基因的sgRNA和Cas9;
所述同源重组片段包括R7基因和筛选标记基因;所述筛选标记基因包括荧光标签基因;所述R7基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的序列;
所述同源重组片段由同源重组质粒线性化得到,所述线性化采用的引物为SEQ IDNo.7和SEQ ID No.8;所述同源重组质粒的核苷酸序列为SEQ ID No.6;
所述靶向ETH_00009555基因的sgRNA为SEQ ID No.2所示的序列。
2.一种重组球虫载体,其特征在于,所述重组球虫载体含有权利要求1所述的ETH_00009555基因编辑系统。
3.根据权利要求2所述的重组球虫载体,其特征在于,所述重组球虫载体为经过权利要求1所述的ETH_00009555基因编辑系统编辑后,在ETH_00009555基因中整合了所述R7基因和荧光标签基因的球虫载体。
4.一种权利要求2或3所述的重组球虫载体的检测方法,其特征在于,所述检测方法包括PCR扩增检测和/或荧光检测;
所述PCR扩增检测的靶点基因包括R7基因和/或荧光标签基因序列,所述PCR扩增检测的正向引物为SEQ ID No.7,所述PCR扩增检测的反向引物为SEQ ID No.8。
5.根据权利要求4所述的重组球虫载体的检测方法,其特征在于,所述荧光检测包括根据所述重组球虫载体的荧光进行检测。
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