[发明专利]一种利用非激素类化合物制备ZZ基因型中华鳖伪雌个体的方法

说明书

本发明提供了一种利用非激素类化合物制备ZZ基因型中华鳖伪雌个体的方法，包括以下步骤：S1、收集中华鳖胚胎，在温度为25‑33℃，空气相对湿度为70％‑90％的孵化条件下，孵化至第15.5期时(参照中华鳖胚胎发育分期标准)，用微量注射器向胚胎注射3‑5μL诱导剂，诱导剂的有效成分为特异性激动剂1,3,5‑三(4‑羟基苯基)‑4‑丙基‑1H‑吡唑；S2、注射诱导剂后，按照与步骤S1相同的孵化条件孵化至稚鳖出壳；S3、在胚胎发育至27期时，收集性腺，进行组织学分析，鉴定中华鳖性别；S4、对中华鳖的ZZ或ZW基因型进行鉴定，分析ZZ伪雌鳖的数量及比例。本发明提供了一种全新的ZZ伪雌鳖诱导方法，具有绿色生态、性别逆转率高、环境污染小的特点。

技术领域

本发明涉及水产品养殖技术领域，尤其涉及一种利用非激素类化合物制备ZZ基因型中华鳖伪雌个体的方法。

背景技术

中华鳖是我国南方名优水产养殖品种之一，其在养殖过程中，存在典型的雌、雄两性异性。研究证实，中华鳖的性别决定方式为遗传型性别决定，属于ZZ/ZW性别决定类别，即雌鳖为ZW染色体，雄鳖为ZZ染色体。生产中雄鳖生长速度快，裙边宽厚，经济价值要高于雌性。研究证实，在胚胎发育过程中，也即性别决定的关键时期，中华鳖的性别受到外部激素的调控，因此中华鳖的人工控制性别育种技术备受关注。如果可以对中华鳖进行性别控制，将ZZ中华鳖雌性化，在ZZ伪雌鳖发育成熟后，就可以和正常的ZZ雄鳖进行交配，为培育ZZ全雄中华鳖提供新的途径。

现有技术一般采用性类固醇激素诱导的方法对中华鳖进行性别控制，如专利号为CN102487883A，专利名称为一种中华鳖性别控制方法的专利通过施加甲基睾丸素来提高中华鳖的雄性比例；专利号为CN102988986A，专利名称为一种中华鳖胚胎期雄性性别诱导剂及诱导方法的专利通过喷洒自睾酮，甲睾酮或丙酸睾酮的方法来进行雄性诱导。但是经过研究发现，现有的中华鳖性别控制技术中存在明显缺陷：用性类固醇激素多次处理胚胎，工作繁琐，且性别不能完全逆转；且所用的性类固醇激素浓度高、用量大，会对环境产生潜在的污染。

发明内容

本发明所要解决的问题是如何开发一种绿色生态、性别控制效果好、环境污染小、可操作性强的ZZ伪雌鳖诱导方法。

为达到上述目的，本发明提供了一种利用非激素类化合物制备ZZ基因型中华鳖伪雌个体的方法，包括以下步骤：

S1、收集中华鳖胚胎，挑选良好的受精的胚胎，将挑选的胚胎放置在经过消毒的黄沙中，孵化至第15.5期时，用微量注射器向胚胎注射3-5μL 诱导剂，诱导剂的有效成分为特异性激动剂1,3,5-三(4-羟基苯基)-4-丙基 -1H-吡唑；

S2、注射诱导剂后，按照与步骤S1相同的孵化条件孵化至稚鳖出壳；

S3、在胚胎发育至27期时，收集性腺，进行组织学分析，鉴定中华鳖为生理性雌性或雄性，统计性别比例；

S4、对中华鳖的ZZ或ZW基因型进行鉴定，分析ZZ伪雌鳖的数量及比例。

相对于现有技术，本发明采用独特的诱导剂对胚胎期的中华鳖进行雌性诱导，避免了现有技术中长时间、多次、大剂量地使用性类固醇激素造成的性腺发育不正常或诱导效果不彻底；本发明所提供的诱导方法在中华鳖的胚胎发育过程中性别决定的关键时间段内，仅需要通过一次低剂量诱导剂注射，即能够实现雌性诱导率100％以上，同时，保证了中华鳖正常的性腺发育及低药物残留；本发明操作简单，效果显著，产生的ZZ伪雌鳖发育成熟后，可以和正常的ZZ雄鳖进行交配，为培育ZZ全雄中华鳖提供新的途径；且该诱导方法对环境的污染小，属于绿色的人工诱导方法。

可选地，所述步骤S1中，诱导剂的制备方法为将特异性激动剂溶于9 2-98％的酒精溶剂或二甲基亚砜(DMSO)中，诱导剂的特异性激动剂浓度为2μg/μL。诱导剂浓度由试验确定，其注射量可以根据蛋的重量进行调整，对于重量较小的蛋注射较少的诱导剂，对于重量较大的蛋则注射较多的诱导剂，由此既保证了诱导率，又保证了中华鳖正常的性腺发育及无药物残留。