[发明专利]质谱流式技术用评估NK细胞培养纯度的检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开的属于质谱流式细胞技术领域，具体为质谱流式技术用评估NK细胞培养纯度的检测试剂盒及应用，本发明公开可检测人体NK细胞免疫状态的试剂盒，所述试剂盒可用于监测人体免疫状态的变化以及评估其NK细胞培养纯度，基于特定或统一的培养方法的基础上，评估样本中NK细胞培养纯度的差异，从而减少NK细胞过度活化，对于评估NK细胞培养纯度较低的样本，控制增加添加物种类或者培养基成份，特异性纯化和活化NK细胞，从而减少NK细胞高纯度培养与NK细胞低纯度培养的样本之间的差异，利用37种抗体，可以在质谱流式细胞仪平台通过静脉采集外周血即可快速、准确地对外周血中免疫细胞进行深度分析以及评估其NK细胞培养纯度。

技术领域

本发明涉及质谱流式细胞技术领域，具体为质谱流式技术用评估NK细胞培养纯度的检测试剂盒及应用。

背景技术

质谱流式细胞技术是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术，它继承了传统流式细胞仪的高速分析的特点，又具有质谱检测的高分辨能力，是流式细胞技术一个新的发展方向。

质谱流式细胞技术可以实现对细胞群体进行精准的免疫分型，对细胞内信号传导网络进行全面的分析，分析细胞亚群之间的功能联系，以及对于大量样品的高通量多参数检测，现有的质谱流式细胞技术大多数都是针对NK细胞培养过程中的培养基成份，或体外加入添加物，或优化分离方法，而忽视样本供体之间的差异，不管是培养基成份或添加物的引入都将过度活化NK细胞，这将造成NK细胞下游研究的异质性。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实施方式，在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于现有NK细胞培养中存在的问题，提出了本发明。

为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：质谱流式技术用评估NK细胞培养纯度的检测试剂盒，本发明公开可检测人体NK细胞免疫状态的试剂盒，所述试剂盒可用于监测人体免疫状态的变化以及评估其NK细胞培养纯度，所述试剂盒包含被标记的37种抗体；

所述37种抗体为单克隆抗体CD45、CD196/CCR6、CD123/IL-3R、CD11c、CD16、CD45RO、CD27、CD183/CXCR3、CD185/CXCR5、CD28、TCRgd、CD294/CRTH2、CD197/CCR7、CD14、CD3、CD20、HLA-DR、CD127/IL-7Ra、CD69、CD137、CD62L、Ki67、NKG2A、NKG2D、NKp30、CD19、CD4、CD8、CD45RA、CD161、CD194/CCR4、CD25/IL-2R、CD38、CD56/NCAM、CD66b、CD11b和NKp44。

一种权利如上所述质谱流式技术用评估NK细胞培养纯度的检测试剂盒的应用，包括以下步骤；

S1.血液收集；

S2.FcR-封闭；

S3.染色，染色共分为两个部分，第一部分进行膜蛋白染色，第二部分进行胞浆蛋白染色；

S4.上机；

S5.数据分析和解读。

作为本发明所述的质谱流式技术用评估NK细胞培养纯度的检测试剂盒的应用的一种优选方案，其中：包括以下步骤；

1)收集5ml的血液于抗凝管中，以防止凝血和血小板活化，在一支空的15ml离心管中，加入5ml血液和等体积D-Hanks液，混合摇匀，另取一支空的50ml离心管，向其中加入10mlFicoll，再用滴管吸取稀释血液，沿管壁缓慢滴加于Ficoll上，形成分层，室温，刹车速度设为1，400gx20min进行密度梯度离心；