[发明专利]一种核壳磷酸钙多肽复合纳米疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种核壳磷酸钙多肽复合纳米疫苗的制备方法，其特征在于，包含CaP@多肽@CaP@CpG纳米颗粒，所述多肽为在中性溶液中带负电的抗原多肽，所述CpG的序列为：TCC ATGACG TTC CTG ACG TT，SEQ NO .03，所述多肽为DDD-VNYIKGFRYELYCLARTARTPLK-DDD，SEQNO 01；

所述制备方法包括如下步骤：

步骤一，将抗原多肽分子及钙盐水溶液混合，并在室温下放置10min-60min；

步骤二，将磷酸盐水溶液逐滴加入到上述多肽/钙盐混合液中，并通过搅拌方式在室温下反应10min-120min，得到CaP@peptide颗粒；

步骤三，由于多肽分子可以参与CaP的矿化过程，因此该步骤可以将多肽分子包裹到CaP内部；

步骤四，通过高速离心的方式收集CaP@peptide颗粒，并将该颗粒重新分散到钙盐水溶液中，并在室温下放置10min-60min之后，继续加入磷酸盐溶液，得到CaP@多肽@CaP颗粒；

步骤五，加入佐剂分子水溶液，通过静电吸附的方式使佐剂分子吸附到壳层CaP表面，得到CaP@多肽@CaP@ CpG纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的一种核壳磷酸钙多肽复合纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述钙盐包括：氯化钙、柠檬酸钙、碳酸钙、硝酸钙、乳酸钙中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种核壳磷酸钙多肽复合纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐包括：磷酸氢二胺、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸胺中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种核壳磷酸钙多肽复合纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的搅拌方式为磁力搅拌、机械搅拌、振荡搅拌中的一种。

5.根据权利要求1所述的一种核壳磷酸钙多肽复合纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤四中的高速离心的离心速度范围是8000rpm-15000rpm。

6.根据权利要求1所述的一种核壳磷酸钙多肽复合纳米疫苗的制备方法，其特征在于，所述佐剂分子为带负电的非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤。