[发明专利]一种自身抗原表位诱导的EAM小鼠模型的建立方法

权利要求书

1.一种自身抗原表位诱导的EAM小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括向造模用的小鼠注射AchR-弗氏完全佐剂溶液、AchR-弗氏不完全佐剂溶液和免疫辅助强化剂；

所述AchR-弗氏完全佐剂溶液是由弗氏完全佐剂和AchR肽段溶液乳化合成；

所述AchR-弗氏不完全佐剂溶液是由弗氏不完全佐剂和AchR肽段溶液乳化合成；

所述免疫辅助强化剂是由人急性单核细胞白血病细胞THP-1刺激分化的成熟树突状细胞混悬液，

注射AchR-弗氏完全佐剂溶液、AchR-弗氏不完全佐剂溶液和免疫辅助强化剂的具体步骤为：在造模当天向造模用的小鼠注射AchR-弗氏完全佐剂溶液，在造模第28-32天向造模用的小鼠注射AchR-弗氏不完全佐剂溶液，在造模第58-62天向造模用的小鼠再次注射AchR-弗氏不完全佐剂溶液，在造模第67-70天注射免疫辅助强化剂，此后连续3-4周于相同时间点注射该免疫辅助强化剂，造模第90±5天，动物模型制备成功。

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述AchR-弗氏完全佐剂溶液中，AchR肽段溶液与弗氏完全佐剂的体积比为1:1，AchR肽段溶液的浓度为150-250ug/ml，注射体积为150-250ul/只；

所述AchR-弗氏不完全佐剂溶液中，AchR肽段溶液与弗氏不完全佐剂的体积比为1:1，AchR肽段溶液的浓度为350-450ug/ml，注射体积为100-150ul/只；

所述AchR肽段溶液中的溶质为AchRα亚基97-116肽段，溶剂为1×PBS溶液。

3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述免疫辅助强化剂，包含由人急性单核细胞白血病细胞THP-1刺激分化的成熟树突状细胞5×10⁶个-5×10⁷个细胞/ml，悬浮于1×PBS溶液中制得的细胞混悬液，注射体积为150-200ul/只/次。

4.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，还包括利用连续性的¹⁸F-FDG PET/CT心肌代谢功能显像、心脏超声检查，以及心肌组织的HE染色、Mason染色和多免疫抗体特染验证该小鼠模型相关的心肌特征性改变；所述多免疫抗体特染包括Musk免疫抗体特染和AchR免疫抗体特染。

5.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于，所述¹⁸F-FDG PET/CT心肌代谢功能显像包括图像解读和SUV mean统计分析，确定EAM小鼠心肌代谢水平的SUV mean范围；

所述心脏超声检查包括对小鼠心率、左室短轴缩短率和射血分数的验证，还包括连续性的¹⁸F-FDG PET/CT心肌代谢功能显像与小鼠心率、左室短轴缩短率和射血分数之间的相关性分析。

6.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于，所述心脏超声检查过程中的小鼠麻醉方法为：采用异氟烷并通过小动物麻醉机麻醉小鼠；

诱导麻醉阶段调节异氟烷浓度为 1.5%，麻醉机气流速度为 1.5L/min；

持续麻醉阶段调节异氟烷浓度为1.5%，麻醉机气流速度为1.0L/min；

麻醉持续期间，麻醉诱导盒外部包裹加热毯，加热毯温度调节为 37℃，维持小鼠体温。

7.根据权利要求4所述的建立方法，其特征在于，横向分析比较¹⁸F-FDG PET/CT心肌代谢功能显像的SUV mean、心脏超声检查及多免疫抗体特染之间的关联性。