[发明专利]一种制备人用乙型脑炎灭活疫苗的方法及疫苗

说明书

本申请公开了一种制备人用乙型脑炎灭活疫苗的方法及疫苗,属于疫苗制造的领域，其中一种制备人用乙型脑炎灭活疫苗的方法，依次包括以下步骤：S1：培养瓶上Vero细胞的无血清适应驯化；S2：生物反应器上Vero细胞的无血清扩增培养；S3：生物反应器中在Vero细胞上接种JEV；S4：病毒的收获、灭活、浓缩以及纯化；S5：对疫苗原液进行冻干处理；本申请具有提高人用乙型脑炎灭活疫苗的安全性、减少人用乙型脑炎灭活疫苗的副作用的效果。

技术领域

本申请涉及疫苗制造的领域，尤其是涉及一种制备人用乙型脑炎灭活疫苗的方法及疫苗。

背景技术

乙型脑炎简称乙脑，是由日本脑炎病毒(JEV)引起的一种人兽共患的蚊媒传染病，属于黄病毒属，主要通过库蚊传播，多流行于亚洲及太平洋地区；且乙脑的危害极大，被世界卫生组织列为重点传染病之一。

JEV感染最初表现为不典型高热，病程通常持续2-3周，临床表现主要为高热、头痛、昏迷、震颤、运动障碍以及神经系统缺陷等症状，儿童常有惊厥发作，如强直阵痉挛发作或局灶性发作；在感染后可能出现免疫介导的横贯性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎以及NMDA脑炎。

目前，仍无有效药物治疗乙脑感染，主要通过接种乙型脑炎疫苗来防治。乙型脑炎疫苗包括用Nakayama/Beijing-1毒株接种鼠脑生产的灭活疫苗、Beijing-1/SA14-14-2毒株接种PHK/VERO细胞生产的灭活疫苗、SA14-14-2毒株接种原代地鼠肾细胞(PHKC)生产的减毒活疫苗以及黄病毒-乙脑病毒嵌合病毒接种VERO细胞生产的嵌合减毒活疫苗。

其中，Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗有效降低了人体感染JEV后的乙型脑炎发病率；但是，灭活的乙型脑炎疫苗虽然经过一定的处理，但是其仍会含有少量的异体蛋白，会刺激机体产生特异性抗体或致敏淋巴细胞，导致呼吸道过敏症、荨麻疹机血管性水肿以及神经系统过敏症等异常的免疫反应，且存在外源病毒污染的潜在风险，人用乙型脑炎灭活疫苗存在具有较多的副作用，安全性较低。

发明内容

为了提高人用乙型脑炎灭活疫苗的安全性，减少人用乙型脑炎灭活疫苗的副作用，本申请提供一种制备人用乙型脑炎灭活疫苗的方法及疫苗。

第一方面，本申请提供一种制备人用乙型脑炎灭活疫苗的方法，采用如下的技术方案：

一种制备人用乙型脑炎灭活疫苗的方法，依次包括以下步骤：

S1：培养瓶上Vero细胞的无血清适应驯化；

S2：生物反应器上Vero细胞的无血清扩增培养；

S3：生物反应器中在Vero细胞上接种JEV；

S4：病毒的收获、灭活、浓缩以及纯化；

S5：对疫苗原液进行冻干处理。

通过采用上述技术方案，在疫苗制作的上游工艺中，对Vero细胞进行无血清适应驯化，得到适应无血清培养基的Vero细胞株，使用该Vero细胞株在生物反应器中进行细胞扩增培养和病毒接种的过程中，使用的是无血清培养基，减少了血清中动物源性物质的潜在病毒危害，且减少了血清供应不稳定对疫苗质量造成的影响。

优选的，所述步骤S1中使用混合培养基对Vero细胞进行培养。

优选的，所述混合培养基中包括含血清培养基、无血清培养基以及混合液组。

优选的，所述混合液组包括血清浓度递减的第一混合液、第二混合液以及第三混合液。

优选的，所述第一混合液中含有7.5％的胎牛血清；所述第二混合液中含有5％的胎牛血清；所述第三混合液中含有2.5％的胎牛血清。

通过采用上述技术方案，混合培养基包括含血清培养基、无血清培养基以及血清浓度呈递减的混合液组，使用该混合培养基对Vero细胞进行连续培养，可得到适应无血清培养基的Vero细胞株。