[发明专利]抗菌肽defensin衍生物及其原核表达方法与应用

权利要求书

1.抗菌肽defensin衍生物，其特征在于，其为ZM-d13、ZM-d14C、ZM-d14CF、ZM-d14CR或ZM-d14CFR：

ZM-d13：GGYCNSKSVCVCR-NH₂；

ZM-d14C：RGCYCNSKSVCVCR-NH₂；

ZM-d14CF：RGCYCNSKSFCVCR-NH₂；

ZM-d14CR：RGCRCNSKSVCVCR-NH₂；

ZM-d14CFR：RGCRCNSKSFCVCR-NH₂。

2.编码权利要求1所述抗菌肽defensin衍生物的核酸分子。

3.含有权利要求2所述核酸分子的生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。

4.抗菌肽defensin或权利要求1所述抗菌肽defensin衍生物的原核表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)通过RACE PCR方法从大麦虫中扩增得到抗菌肽defensin的编码基因，或者人工合成权利要求1所述抗菌肽defensin衍生物的编码基因；

(2)构建重组载体：将所述编码基因插入到原核表达载体中，构建得到包含所述编码基因的重组载体；

(3)表达抗菌肽defensin或其衍生物：用重组载体转化大肠杆菌，利用IPTG诱导后收集包含抗菌肽defensin或其衍生物的细菌；

其中，抗菌肽defensin在NCBI上的参考序列编号为P80033.1。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括采用PBS处理诱导后细菌，超声破碎后离心并收上清液；依次采用GST柱亲和层析和Superdex30凝胶过滤层析纯化所述上清液，获得纯化的抗菌肽defensin或其衍生物。

6.权利要求1所述抗菌肽的以下任一应用：

1)用于抑制细菌；

2)用于制备抑菌剂；

3)用于制备防腐剂；

4)用于制备抗菌药物；

所述细菌包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述细菌包括大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎克雷伯菌(KlebsiellaPneumoniae)、沙门氏菌(Salmonella)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、溶血葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)。

8.抗菌药物，其特征在于，有效成分为抗菌肽defensin和/或权利要求1所述抗菌肽defensin衍生物；

其中，抗菌肽defensin在NCBI上的参考序列编号为P80033.1。

9.抑菌剂或防腐剂，其特征在于，有效成分为抗菌肽defensin和/或权利要求1所述抗菌肽defensin衍生物；

其中，抗菌肽defensin在NCBI上的参考序列编号为P80033.1。

10.抗菌肽defensin和/或权利要求1所述抗菌肽defensin衍生物在制备用于治疗或减轻由大肠杆菌导致的乳腺炎的药物中的应用。