[发明专利]一种近红外细胞染液的制取方法

权利要求书

1.一种近红外细胞染液的制取方法，其特征在于：在含1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的无菌水中加入吲哚菁绿（ICG）衍生物，避光摇晃活化后，再加入含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列多肽(Arg-Gly-Asp，RGD)，继续避光反应后, 使得活化后的ICG衍生物与含RGD 序列多肽进行酰胺化反应进行偶联，得到具有近红外光特性的细胞染液。

2.根据权利要求1所述近红外细胞染液的制取方法，其特征在于，所述的ICG衍生物，包括但不局限于吲哚箐绿-羧酸(ICG-COOH)、吲哚箐绿-氨基(ICG-NH₂) 、吲哚菁绿-琥珀酰亚胺脂（ICG- NHS ester）中的一种，所述的ICG衍生物浓度为1-100 μg/mL，最优为50 μg/mL。

3.根据权利要求1或2所述近红外细胞染液的制取方法，其特征在于，所述的RGDS序列肽浓度为10-100 μg/mL，最优为30 μg/mL。

4.根据权利要求1所述近红外细胞染液的制取方法，其特征在于，在含10 mL 含50mmol EDC和25 mmol NHS的无菌水中加入1 mg红外光吲哚箐绿衍生物 ICG-COOH后，避光摇晃活化30 min，得到活化后的ICG-NHs，再加入10-100 μg/ mL RGDS (序列Arg-Gly-Asp-Ser)继续避光反应2 h, 使得活化后的ICG-NHs与RGDS进行酰胺化反应进行偶联，即可得到具有近红外光特性的ICG-RGDS染液，4℃备用。

5.根据权利要求4所述近红外细胞染液的制取方法，其特征在于，按下述步骤制备：

在含10 mL 含50 mmol 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）和25mmol N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）的无菌水中加入1 mg吲哚菁绿（ICG）衍生物 ICG-COOH后，避光摇晃活化30 min后，得到活化后的ICG-NHs，再加入100 μg/ mL含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列多肽RGDS (序列Arg-Gly-Asp-Ser)，继续避光反应2 h后, 使得活化后的ICG-NHs与含RGD序列多肽RGDS进行酰胺化反应进行偶联，得到具有近红外光特性的细胞染液ICG-RGDS染液，4℃备用。

6.根据权利要求4所述近红外细胞染液的制取方法，其特征在于，按下述步骤制备：

一种近红外细胞染液，与实施例1步骤近似，按下述步骤制备：

在含10 mL 含50 mmol EDC和25 mmol NHS的无菌水中加入0. 1mg ICG-COOH后，避光摇晃活化30 min，得到活化后的ICG-NHs，再加入100 μg/ mL RGDS继续避光反应2 h, 使得活化后的ICG-NHs与RGDS进行酰胺化反应进行偶联，即可得到ICG-RGDS染液，4℃备用。

7.根据权利要求4所述近红外细胞染液的制取方法，其特征在于，按下述步骤制备：

在含10 mL 含50 mmol EDC和25 mmol NHS的无菌水中加入1 mg ICG-COOH后，避光摇晃活化30 min，得到活化后的ICG-NHs，再加入10 μg/ mL RGDS继续避光反应2 h, 使得活化后的ICG-NHs与RGDS进行酰胺化反应进行偶联，即可得到ICG-RGDS染液，4℃备用。

8.一种近红外细胞染液，其特征在于，根据权利要求1至7任一项制备方法得到的。

9.一种根据权利要求8近红外细胞染液的应用，其特征在于，细胞染色，用于作为发光探针、生物成像应用。

10.根据权利要求9近红外细胞染液的应用，其特征在于，所述的细胞染色：将配制成含1% ICG-RGDS染液的细胞培养基，加入生长期的MGC-803细胞中，培养箱中避光温育1 h，之后吸取培养基，用PBS冲洗贴壁的MGC-803细胞，去除非特异性吸附的染液，即可完成细胞染色。