[发明专利]CVA16检测引物及检测方法

说明书

本发明属于生物检测领域，具体涉及CVA16检测引物及检测方法。一组引物，包括两条置换引物F1和F2，两条交叉内引物CP1和CP2，6条扩增引物C1和C2、D1和D2、R1和R2。本发明针对柯萨奇病毒A组16型VP1基因设计一套MCDA扩增引物，建立了一套针对CVA16的快速、敏感和特异的MCDA‑LFB检测体系。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及CVA16检测引物及检测方法。

背景技术

柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CVA16)是引起手足口病的重要病原体。该病毒通过粪口传播，在儿童人群中传播较快，是重点检测的传染病原之一。

CVA16为单股正链RNA病毒，属于小RNA病毒科肠道病毒属成员，由约7410个核苷酸组成，仅包含一个大的开放阅读框(open reading frame,ORF),该ORF可进一步翻译产生11种蛋白产物，其中衣壳蛋白VP1是病毒主要的中和抗原决定簇位点，该区的基因序列常被用于病原的分子鉴定及分子流行病学研究。

但遗憾的是，目前暂无针对CVA16的有效治疗药物和疫苗，CVA16的致病机制仍不清楚。因此，为了给予临床病人准确快速的治疗，研发一种省时、省力、特异性高的柯萨奇病毒A组16型检测方法非常必要。

目前对于CVA16的检测主要依赖于传统的病毒培养和中和试验。该方法耗时5到7天，包括细胞培养、接种及后续的中和试验，耗时耗力。随着核酸诊断技术的快速发展，以PCR为基础的诊断技术(如普通PCR技术，荧光PCR技术)被用于CVA16的检测，然而这些方法依赖于昂贵的仪器设备，复杂的电泳操作，昂贵的探针合成，以及熟练的操作人员，极大限制了这些技术的运用。且这些检测技术耗时较长，不利于快速检测和应急检测。

为了克服PCR扩增技术的劣势，近年来发展了许多恒温扩增技术。较PCR技术而言，恒温扩增技术不依赖于热循环扩增设备，反应速度快，敏感性好。因此，恒温扩增技术有利于实现快速扩增，便捷检测及现场诊断。到目前为止，已发展的恒温扩增技术有10余种，应用较为广泛的有滚环扩增(RCA)、连置换扩增(SDA)、解旋酶依赖的恒温扩增(HDA)、环介导恒温扩增(LAMP)、交叉扩增(CPA)等。然而，这些恒温技术实现核酸扩增需要多种酶同时工作，且也依赖于昂贵的试剂和复杂的操作步骤。因此这些方法的实用性、便捷性、可操作性有待于提高，尤其是在快速诊断领域及欠发达地区。

近期，我国科学家发明了一种新的恒温扩增技术：多交叉置换扩增(Multiplecross displacement amplification，MCDA)。MCDA能够在恒温条件下实现靶序列扩增，可以仅使用一种恒温置换酶，具有扩增速度快、反应灵敏、特异性高的特点。为了使该技术更为广泛应用到生物、医药及卫生领域，后续研究已经将MCDA技术与纳米横向测流检测技术相结合，实现快速、简单、特异及敏感检测的纳米生物传感技术，即多交叉恒温扩增结合高分子纳米生物传感的核酸诊断技术(Multiple Cross Displacement Amplificationlabel-based Polymer Nanoparticles Lateral Flow Biosensor,MCDA-LFB)。

如果能将MCDA-LFB技术用于CVA16的检测，针对柯萨奇病毒A组16型VP1基因设计一套MCDA扩增引物，则有望建立针对CVA16的快速、敏感和特异的MCDA-LFB检测体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种可检测CVA16的引物及检测方法。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一组引物，包括两条置换引物F1和F2，两条交叉内引物CP1和CP2，6条扩增引物C1和C2、D1和D2、R1和R2；