[发明专利]一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系及其构建方法和应用

说明书

本发明属于细胞重组与蛋白表达技术领域，具体涉及一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系及其构建方法和应用，本发明公开了一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系，所述细胞系为中国仓鼠卵巢细胞CHO‑CD2v，于2021年11月11日送往广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No:62052。本发明的细胞系是将外源基因CD2v整合入中国仓鼠基因组内已知的安全位点，从而实现转入基因的正常表达而又不影响细胞的正常生理功能，其构建过程简单，克隆准确度高。该细胞系可以用于高产CD2v蛋白，非洲猪瘟药效筛选、疫苗生产等方面，对于非洲猪瘟的诊断和疫苗生产具有非常重要的意义。

技术领域

本发明属于细胞重组与蛋白表达技术领域，具体涉及一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系及其构建方法和应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)引起猪的一种出血性，高度接触性传染病，其临床症状与猪瘟极其相似。ASF是全球养猪业的一种新兴疾病。该病于2018年8月在我国辽宁省沈阳市首次发生，ASF的传入已严重威胁到我国生猪产业的存续。该疫情难以控制的一个主要原因是目前世界范围内尚无商品化的有效疫苗，并且由于缺乏关于ASF病毒(ASFV)抗原的知识而阻碍了相关研究的进展。有研究表明，ASFV血清型特异性蛋白CD2v(EP402R)对于防止同源ASF感染是具有至关重要的作用。

CD2v是存在于ASF病毒颗粒外部包膜上的唯一蛋白质，为病毒进入细胞或在细胞之间传播的特征蛋白，由信号肽序列和一个跨膜区组成，因为它拥有两个免疫球蛋白样的结构域，其氨基酸序列与CD2分子非常相似。存在于病毒外部包膜上的CD2v通过介导细胞外病毒粒子与红细胞的附着，可以促进病毒的传播。此外，CD2v还可以通过抑制淋巴细胞增殖从而使病毒在体外具有免疫抑制活性。

CHO细胞，即中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary)，该细胞具有不死性，可以传代百代以上，是目前生物工程上广泛使用的细胞。与其他细胞表达系统相比，CHO表达系统具有准确的转录后修饰功能，表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子，同时，CHO还具有产物胞外分泌功能，并且很少分泌自身的内源蛋白。除此之外，CHO还具有重组基因高效扩增和表达，外源蛋白整合稳定等优点。因此，CHO被视为表达复杂生物大分子的理想宿主。

综上可见，利用基因工程技术将CD2v稳定整合至中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的基因组以构建稳定表达的CD2v细胞系，对于非洲猪瘟的诊断和疫苗生产具有非常重要的意义。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的首要目的是提供一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系。

本发明的第二个目的是提供上述稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系的构建方法。

本发明的第三个目的是提供上述稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系的应用。

本发明的上述第一个目的是通过以下技术方案来实现的：

一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系，所述细胞系为中国仓鼠卵巢细胞CHO-CD2v，于2021年11月11日送往广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No:62052。

血清型特异性蛋白CD2v(EP402R)是存在于病毒颗粒外部包膜上的唯一蛋白质，为病毒进入细胞或在细胞之间传播的特征蛋白。存在于病毒外部包膜上的CD2v可以通过介导细胞外病毒粒子与红细胞的附着，促进病毒的传播。此外，其还可以通过抑制淋巴细胞增殖从而使病毒在体外具有免疫抑制活性。因此构建可以稳定表达CD2v的细胞系，对于非洲猪瘟的诊断和疫苗生产具有非常重要的意义。而中国仓鼠卵巢细胞CHO可以将外源基因整合入基因组内已知的安全位点，实现转入基因的正常表达而又不影响细胞的正常生理功能。