[发明专利]一种表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系，HOXA10的序列如SEQ ID NO：4所示。本发明还提供了一种表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系的制备方法，从人脐带间充质干细胞中扩增HOXA10基因；将获得的HOXA10基因克隆到慢病毒载体中；将带有HOXA10的慢病毒感染人脐带间充质干细胞，得到表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系。本发明还提供了上述表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系在制备用于治疗子宫内膜损伤的药物中的应用。本发明发现T10‑UCMSCs细胞系显著提高了干细胞修复子宫内膜损伤的治疗效果，对于子宫内膜损伤所导致的不孕不育的临床治疗有很大帮助。

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种人脐带间充质干细胞系，具体来说是一种表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

子宫是女性重要的生理器官，维持着女性的生理特征及生育功能。其中子宫内膜对胚胎着床及妊娠其着重要作用。子宫内膜损伤是女性不孕症的主要原因。

现有方案是将UCMSCs通过尾静脉或者宫腔移植于子宫，从而提高子宫内膜厚度，缓解受损部位纤维化，达到治疗效果。

由于个体差异的存在，治疗方法如激素替代疗法效果不理想，这使得干细胞治疗在临床上具有广阔的前景。然而胚胎干细胞虽然具有全能性，并被证明体外可修复受损子宫内膜，但是伦理问题及成瘤性极大限制了其应用。人体废弃组织脐带中分离得到的脐带间充质干细胞以其广泛来源/获取方式容易，无伦理争议，免疫原性低而成为临床最佳的种子细胞。目前脐带间充质干细胞(UCMSCs)初步被证实能一定程度上有效改善子宫内膜的恢复，但由于宫内环境的影响，修复效果有限，疗效不稳定。

同源框基因(HOX)属于保守型高的多基因家族的转录调节基因，在哺乳动物中可分为A、B、C、D四个基因簇，在染色体上排列成簇，排列顺序与其所控制的胚胎发育功能密切相关。HOXA10基因主要表达于子宫内膜，在维持子宫内膜发育和胚胎着床中起重要作用。而HOXA10联合干细胞在体内的治疗尚不清楚。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种及其制备方法和应用，所述的这种表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系及其制备方法和应用要解决现有技术中的药物对于子宫内膜损伤的效果不佳的技术问题。

本发明提供了一种表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系，HOXA10的序列如SEQ IDNO：4所示。

本发明还提供了一种表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系的制备方法，包括如下步骤：

(1)从人脐带间充质干细胞中扩增HOXA10的基因；

(2)将步骤1)获得的HOXA10基因克隆到慢病毒载体中；

(3)将带有HOXA10的慢病毒并感染人脐带间充质干细胞，得到表达HOXA10的人脐带间充质干细胞系。

进一步的，在步骤1)中，先提取人脐带间充质干细胞的总RNA，然后反转录为cDNA，根据HOXA10的CDS序列，HOXA10的CDS序列如SEQ ID NO：1所示，利用primer5软件设计与pLv-AcGFP载体HindIII酶切位点前后20bp同源臂的引物序列，以人脐带间充质干细胞反转录获得的cDNA为模板进行扩增。

具体的，上述引物序列的上游引物的序列如SEQ ID NO：2所示，下游引物的序列如SEQ ID NO：3所示。

进一步的，在步骤2)中，将HOXA10基因克隆到慢病毒载体pLV-AcGFP1-N1质粒中，用限制性内切酶HindIII对载体pLV-AcGFP进行酶切，对以上酶切产物和PCR产物进行回收，然后将酶切产物和PCR产物进行同源重组。