[发明专利]一种噬菌体冻干粉制剂及其生产方法

说明书

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及到一种噬菌体冻干粉制剂及其生产方法。本申请的一种噬菌体冻干粉制剂，包括下列的物质：具有生物活性的噬菌体、保护剂、赋性剂、助剂；其中，保护剂包括海藻糖、脱脂奶粉中至少一种；赋性剂包括甘露醇、甘氨酸、谷氨酸钠、麦芽糊精、可溶性淀粉中的一种或多种；助剂包括麦芽糊精、白糊精、脱脂奶粉、玉米浆干粉、蒙脱石粉、轻质碳酸钙、二氧化硅粉末中的一种或多种，通过在冻干过程添加保护剂和赋性剂，并在冻干结束后添加助剂后冷藏保存，对噬菌体活力具有优异的保护能力，平均活力残留大于50％，添加助剂后可稳定冻干粉形态，降低冻干粉结块倾向，使得噬菌体保存半年平均活力下降小于0.2log。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及到一种噬菌体冻干粉制剂及其生产方法。

背景技术

目前抗生素在控制人、畜细菌性传染病方面的作用不容置疑。然而，抗生素的滥用也带来了如药物残留、细菌耐药性和体内体外环境中菌群失调等诸多问题。近20年来，噬菌体(bacteriophage，常称为phage)作为抗菌剂已逐渐展现出替代抗生素的巨大潜力，并表现出迅猛增长的研究态势。噬菌体是细菌的天敌，本质上是一种有益病毒，具有体积小、特异性高、稳定性强、安全性高及绿色环保等特点。噬菌体用于养殖业可提高畜、禽、鱼等动物的存活率和生长率，用于医疗可降低患者细菌性疾病的发病率及死亡率，用于食品业可延长食品的保鲜期。因此，噬菌体具有广阔的应用前景。

由于噬菌体属极微小的生物，其活性受各种不同因素的影响，因此，从其制备到实际应用这段时间的保藏条件至关重要，而为了最大限度地发挥其功效，人们尝试了多种不同的保藏方法。目前国内外关于噬菌体的实用保藏方法主要分为悬液法(suspension)、冻液法(freezing)和干燥法(drying)。由于每种噬菌体的性质各不相同，若保藏方法不当会造成极大损失，因此要使噬菌体在长期保藏条件下还具有较高的活性及稳定性，并且不被污染，不仅需要考虑其各自特性，还需考虑如介质、分散剂和温度等外界影响因素。因此，如何维持噬菌体的高活性，并找到简便且成本低廉的保藏方法是当务之急。

发明内容

本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种噬菌体冻干粉制剂及其生产方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种噬菌体冻干粉制剂，包括下列的物质：具有生物活性的噬菌体、保护剂、赋性剂、助剂；其中，所述保护剂包括海藻糖、脱脂奶粉中至少一种；所述赋性剂包括甘露醇、甘氨酸、谷氨酸钠、麦芽糊精、可溶性淀粉中的一种或多种；所述助剂包括麦芽糊精、白糊精、脱脂奶粉、玉米浆干粉、蒙脱石粉、轻质碳酸钙、二氧化硅粉末中的一种或多种。

进一步的，具有生物活性的噬菌体为宿主是无致病性细菌或是发酵后进行杀灭或分离的低致病性细菌。

进一步的，宿主包括大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌、副溶血弧菌、点状气单胞菌、哈维氏弧菌、弗氏柠檬酸杆菌中的至少一种。

一种噬菌体冻干粉制剂的生产方法，生产上述的噬菌体冻干粉制剂，其包括以下步骤：

S1、制备噬菌体悬液：选取宿主为无致病性细菌或是发酵后进行杀灭或分离的低致病性细菌，按照噬菌体的培养方法获得噬菌体悬液；

其中宿主经杀灭或分离后的含量以噬菌体商品粉菌落含量要求为基准，噬菌体悬液经过稀释，冻干，复配保存，成品稀释等流程获得成品，一般当成品质检要求不得检出时，初始噬菌体悬液宿主CFU应小于300；成品质检要求CFU＜10时，初始噬菌体悬液宿主CFU应小于1000～5000，成品质检要求CFU＜100时，初始噬菌体悬液宿主CFU应小于10000～50000；

S2、制备噬菌体待冻干混合液：将步骤S1中的噬菌体悬液稀释后，加入保护剂和赋性剂溶解混合，制得噬菌体待冻干混合液；

S3、制备噬菌体冻干初粉：将步骤S2中的噬菌体待冻干混合液，放入冻干机中冷冻干燥，获得噬菌体冻干初粉；