[发明专利]一种基于黄原胶的HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体及其制备方法、试剂盒在审
申请号: | 202111527831.0 | 申请日: | 2021-12-14 |
公开(公告)号: | CN114295824A | 公开(公告)日: | 2022-04-08 |
发明(设计)人: | 陆浩;徐珂;张国家;张哲荣;董方 | 申请(专利权)人: | 东方伊诺(苏州)医疗科技有限公司 |
主分类号: | G01N33/535 | 分类号: | G01N33/535;G01N33/548;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/68 |
代理公司: | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人: | 李萍 |
地址: | 215000 江苏省苏州市工业*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 黄原胶 hrp 标记 鼠抗人 肌钙蛋白 单克隆抗体 及其 制备 方法 试剂盒 | ||
本发明公开了一种基于黄原胶的HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体及其制备方法、试剂盒。该制备方法包括:步骤一、氧化黄原胶得到含醛基的黄原胶;步骤二、将所述含醛基的黄原胶与辣根过氧化物酶聚合得到辣根过氧化物酶多聚物;步骤三、对所述辣根过氧化物酶多聚物进行纯化;步骤四、鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体连接到纯化后的辣根过氧化物酶多聚物上;步骤五、对步骤四的产物纯化,得所述HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体。本发明的鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体具有较高的检测灵敏度。
技术领域
本发明属于生物检测技术领域,涉及一种基于黄原胶的HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体及其制备方法,还涉及一种用于检测急性心肌梗死的试剂盒。
背景技术
肌钙蛋白是心肌损伤坏死的标志物,检测人血清中肌钙蛋白I对急性心肌梗死的诊断和危险分层有重要的临床意义。心肌肌钙蛋白I在人血清中含量特别低,需要采用高灵敏度的方法来检测。
目前,酶免疫检测法中抗体或抗原酶标记物对免疫检测分析的灵敏度及特异性具有重要的作用,是酶免疫分析检测中的关键试剂。辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)比活性高、稳定、分子量小、纯酶容易制备,因而是现在最常用的蛋白酶标记物的制备原料。传统的辣根过氧化物酶标抗体,是应用酶和抗体上氨基、巯基或糖蛋白上的羟基作为交联的基团,通过过碘酸钠或戊二醛法将抗体与酶直接连接在一起。由于分子大小不同,一般一个抗体分子上仅能联接1~2个HRP分子。免疫反应通过HRP催化底物来显现,该传统的HPR标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体的检测灵敏度有限。
发明内容
针对上述问题,本发明提供一种基于黄原胶的HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体,具有较高的检测灵敏度。
本发明还提供一种基于黄原胶的HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体的制备方法,其制得的看题检测灵敏度较高,且产物应用效果良好。
本发明还提供一种用于检测急性心肌梗死的试剂盒,其具有较高的检测灵敏度。
根据本发明的第一个方面,一种基于黄原胶的HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体的制备方法,包括:
步骤一、氧化黄原胶得到含醛基的黄原胶;
步骤二、将所述含醛基的黄原胶与辣根过氧化物酶聚合得到辣根过氧化物酶多聚物;
步骤三、对所述辣根过氧化物酶多聚物进行纯化;
步骤四、鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体连接到纯化后的辣根过氧化物酶多聚物上;
步骤五、对步骤四的产物纯化,得所述HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体。
在一具体且优选的实施例中,所述制备方法具体实施如下:
步骤一、5-8mg黄原胶与15-25mg高碘酸钠反应,得到含醛基的黄原胶;
步骤二、步骤一得到的含醛基的黄原胶中加入5-15mg辣根过氧化物酶,充分混匀后再加入35-45mg三乙酰基硼氢化钠,3-5℃旋转,得辣根过氧化物酶多聚物;
步骤三、步骤二得到的辣根过氧化物酶多聚物用磷酸盐缓冲液透析,得透析物;
步骤四、步骤三得到的透析物中加入2-4mg鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体充分混合后加入三乙酰基硼氢化钠,旋转反应3-5小时;
步骤五、磷酸盐缓冲液透析换液,取出透析物,得所述HRP标记鼠抗人肌钙蛋白I单克隆抗体。
在一优选的实施例中,步骤一中,通过高碘酸钠氧化黄原胶。
更优选地,步骤一中,5-8mg黄原胶与15-25mg高碘酸钠反应,得到含醛基的黄原胶。
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