[发明专利]明胶类酶活保护剂的制备方法及其在降纤酶制剂中的应用

说明书

本发明涉及一种明胶类酶活保护剂的制备方法及其在降纤酶制剂中的应用，所述制备方法包括如下步骤：对明胶溶液进行物理剪切，然后过滤、灭菌、冻干，得到所述明胶类酶活保护剂。本发明提供的明胶类酶活保护剂不仅能够对降纤酶的酶活力提供有效的包裹性保护，在生产和长期储存过程中，提供紧密的保护骨架，阻止降纤酶分子之间的聚合；同时不具有酶活放大效应，能够实现对于中间体的有效监控；并且可以使冻干过程的吹干效应可以大大减少，进一步地保护了酶活的稳定性。

技术领域

本发明涉及生物和生化技术领域，尤其涉及一种明胶类酶活保护剂的制备方法及其在降纤酶制剂中的应用。

背景技术

降纤酶是一种特定作用于纤维蛋白原的丝氨酸类蛋白水解酶，在人体内，其直接作用于血液系统的纤维蛋白原，使之转变为非交联的纤维蛋白碎片，激活人体内的纤溶系统，刺激血管内皮细胞，释放出组织型纤溶酶原激活剂，具有间接溶解血栓，抑制血栓形成，改善微循环的作用；用降纤酶原料经冻干工艺制成的注射用降纤酶（药物成分包括降纤酶、骨架赋形剂右旋糖酐和酶活力稳定剂）或降纤酶注射液，临床上可以用于血管栓塞性疾病的治疗和预防，目前市售药品按酶活力计量有5 BU/支和10 BU/支两种规格。

对于降纤酶制剂而言，降纤酶的酶活力稳定性是影响药品生产、药品质量、药品销售的重要因素，基本上贯穿于从药品生产、质量检验、存储、运输直至临床使用的各个环节。

目前，为了避免冻干过程中酶活损失，生产出符合要求的降纤酶制剂，部分生产者会经验性的按酶活力标示量的130%-180%超限投料，此种做法不仅会增加药品的原料消耗和生产成本，还会增加药品中相关杂质的含量以及增加实际药品含量的不确定性和临床使用风险，同时，在药品存储、运输等过程中，由于酶活力的降低，同样会严重影响按处方剂量合理用药的安全性。

或者，还可以添加酶活力保护剂确保酶活力稳定性。目前在降纤酶制剂中研究使用的酶活保护剂包括人血白蛋白、部分水解明胶或水解明胶等。经研究，人血白蛋白是人体中自然存在的一种药物结合蛋白，对降纤酶的活力有活化作用，容易导致降纤酶中间体药液和成品制剂酶活力虚高，影响了制剂装量的准确性；同时由于人血白蛋白存在潜在的血源性病毒污染、资源的稀缺性和较高的生产成本和社会成本，国家药监部门明确限制其作为药品辅料的应用。而部分水解明胶或水解明胶由明胶经酸、碱、或酶水解而得到，其中包括的小分子明胶多肽和多种氨基酸对降纤酶中间体定容灌装前的配制液的酶活力同样会产生酶活力放大效应，虽然冻干后的注射用降纤酶成品的酶活放大效应大大减少或消失，但是对于制剂生产过程中质量控制的关键步骤-中间体监测仍然具有质量控制的不确定性。

降纤酶从原料到制剂的生产过程，酶活稳定性有如下特点：降纤酶原液纯度越高酶活越不稳定，中间体药液浓度越稀或成品分布密度越小酶活越不稳定。纯化的降纤酶是高比活力的蛋白酶，符合药用标准的降纤酶比活根据纯度的提高，蛋白比活达到2500-3000BU/mg，而每支降纤酶药品中降纤酶的含量极少，通常为2-5μg，按药液质量占比计，降纤酶原料占比不超过每支药品内容物的二十万分之一，因此，药液配制、冻干以及成品的放置阶段，降纤酶极易损失活性，对降纤酶和部分失活的降纤酶利用高效液相色谱（HPLC）进行检测，由检测结果可知，在降纤酶部分失活后，降纤酶主峰前新产生一个大分子的杂质峰，因此推测上述过程中，降纤酶活性损失的主要原因可能是由于降纤酶分子的聚合。

综上所述，对降纤酶及高纯度降纤酶的研究表明，多种类型的保护剂例如氨基酸、蔗糖、多元醇等单独使用作为降纤酶的保护剂，起不到有效的酶活保护效果；多组分配合使用，对降纤酶的中间体溶液的含量测定产生显著的放大影响，进而对临床用药的安全性和生产的质量可控性产生潜在的负面影响，因此，为了解决上述问题，迫切需要提供一种对降纤酶具有高稳定性，同时不影响其生产质量监控的酶活稳定剂。

发明内容

为了解决上述技术问题或者至少部分地解决上述技术问题，本发明提供了一种明胶类酶活保护剂的制备方法及其在降纤酶制剂中的应用。