[发明专利]一种产乳酸牛链球菌及其分离方法

说明书

本发明提供一种产乳酸牛链球菌及其分离方法，涉及牛链球菌分离技术领域。该产乳酸牛链球菌的分离方法，包括以下步骤：S1：原料制取：取正常牛的粪便100克，对其进行稀释，过滤杂质，留下滤液，装入无菌厌氧密封袋中并密封，S2：制备培养基：以水为溶质，向其中加入以下质量份数：可溶性淀粉2.0‑4.0克、葡萄糖10‑30克、磷酸氢二钾0.5‑1.5克、碳酸钙3‑5克、硫酸镁0.2‑0.4克、酵母粉0.4‑0.6克、琼脂20‑40克、1％结晶紫溶液1毫升。通过在常用的培养基组分中加入淀粉和琼脂，可加快牛链球菌高于其它细菌的生长速率，迅速增殖，形成优势菌群，更易后续分离，且通过在常用的培养基组分中加入结晶紫溶液，易于对颜色进行区分，可快速将牛链球菌从其它细菌中挑选出来。

技术领域

本发明涉及牛链球菌分离技术领域，具体为一种产乳酸牛链球菌及其分离方法。

背景技术

牛链球菌是食草动物消化道内的正常菌群，常见于牛的胃肠道和粪便，也可以从狗、大熊猫、单峰驼、黑鹿、羊、考拉和驯鹿等动物的胃肠道和粪便中分离到。牛链球菌也是人胃肠道内的常见菌群，可以从人的胃肠道、粪便、以及食品中分离到。所以，一直以来，人们都认为牛链球菌是许多动物、人胃肠道内的一种无害细菌。但是，1945年，Mc-Neal和Blevins首次报道牛链球菌可以引起感染性心内膜炎。心内膜炎患者发病前多有瓣膜异常或系修补瓣膜。牛链球菌败血症或心内膜炎患者常伴有肠道恶性肿瘤。

现有关于对牛链球菌的分离技术仍存在缺陷，对于培养基的制备组分和要求较高，同时对于牛链球菌和其它细菌的培养分离存在不便，导致分离不完全，且分离后的牛链球菌纯度较低，所以现在需要一种能够解决以上问题的产乳酸牛链球菌及其分离方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种产乳酸牛链球菌及其分离方法，解决了分离不便，且纯度低的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种产乳酸牛链球菌，该牛链球菌取自牛的粪便中。

一种产乳酸牛链球菌的分离方法，包括以下步骤：

S1：原料制取

取正常牛的粪便100克，对其进行稀释，过滤杂质，留下滤液，装入无菌厌氧密封袋中并密封；

S2：制备培养基

以水为溶质，向其中加入以下质量份数：可溶性淀粉2.0-4.0克、葡萄糖10-30克、磷酸氢二钾0.5-1.5克、碳酸钙3-5克、硫酸镁0.2-0.4克、酵母粉0.4-0.6克、琼脂20-40克、1％结晶紫溶液1毫升；

S3：进行培养

取S1中滤液10毫升，将其与S2中制得的培养基进行混合，并置于厌氧培养瓶中，继续放置于37℃保温箱中震荡培养24小时；

S4：进行分离

除去厌氧培养瓶中的培养液，保留沉淀物，挑取少许沉淀，置于分离培养板中，在厌氧条件下37到39℃避光培养24到36小时，挑选表面湿润、有光泽、颜色为乳白色的圆滴状菌落，进行革兰氏染色鉴定，选择鉴定结果为革兰氏阳性的菌落进一步转移至新的分离培养板中分离培养；

S5：进行保存

用接种棒挑出纯菌株的菌落，转至含保存培养基的冻存管中，旋盖密封，并涡旋震荡30秒，投入液氮速冻，随后再转移至－80℃超低温冰箱长期保存。

优选的，所述S2中，其制备方法为：把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他组分，使它溶解，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水至总容量为1000毫升，调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。