[发明专利]一种循环肿瘤细胞系的建立方法

权利要求书

1.一种循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1、对肿瘤细胞进行贴壁细胞培养，包括：

S11、在无菌细胞培养容器a中采用平面培养的方法对肿瘤细胞进行贴壁细胞培养，平面培养时的培养基使用该肿瘤细胞推荐的贴壁细胞培养基或通用培养基；每2～3天更换一次无菌细胞培养容器a中的培养基，贴壁细胞达到80％～90％融合度时传代；

S12、每次更换培养基时，将至少一个无菌细胞培养容器a中旧的培养基加入到一个无菌细胞培养容器b中，此时旧的培养基中包含贴壁细胞系对应的少量悬浮细胞；

S2、对悬浮细胞进行悬浮细胞培养，包括；

S21、将无菌培养容器b静置使悬浮细胞沉降富集；然后，吸走上层培养基；

S22、向无菌培养容器b中加入适合悬浮细胞的悬浮细胞培养基，使无菌培养容器b中的培养基体积恢复到初始体积；

S23、震荡无菌培养容器b使细胞分散均匀，此时无菌培养容器b中含有的悬浮细胞即为贴壁肿瘤细胞系对应的循环肿瘤细胞；

S3、利用悬浮培养方法，扩增无菌培养容器b中的循环肿瘤细胞，即建立对应的循环肿瘤细胞系。

2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，还包括：S24、重复S21和S22以提高所述无菌培养容器b中悬浮培养基的比例。

3.根据权利要求2所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，还包括：S25、重复S1和S21～S24以增加无菌培养容器b中悬浮细胞的数量，使其达到能够自行繁殖的数量，并继续使用悬浮培养方法，使其扩增到足够可传代、冻存、复苏的数量。

4.根据权利要求1-3任一项所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，所述肿瘤细胞指实体肿瘤细胞或非实体肿瘤细胞。

5.根据权利要求4所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为SKBR-3细胞、BT474细胞、MDA-MB-435细胞、HS578T细胞或MCF-7细胞。

6.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，当所述肿瘤细胞为SKBR-3细胞时，S1中的贴壁细胞培养基为含有10％胎牛血清和1％双抗的高糖DMEM培养基；S2中的悬浮细胞培养基是含有10％胎牛血清和1％双抗的RPMI1640培养基。

7.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，当所述肿瘤细胞为BT474细胞时，S1中的贴壁细胞培养基包含RPMI1640、10％胎牛血清、1％双抗和1％丙酮酸钠；S2中的悬浮细胞培养基包含RPMI1640、10％胎牛血清、1％双抗和1％丙酮酸钠。

8.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，当所述肿瘤细胞为MDA-MB-435细胞时，S1中的贴壁细胞培养基包含DMEM/F12、10％胎牛血清和1％双抗；S2中的悬浮细胞培养基包含DMEM/F12、10％胎牛血清和1％双抗。

9.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，当所述肿瘤细胞为HS578T时，S1中的贴壁细胞培养基包含DMEM、10％胎牛血清、1％双抗和0.01mg/mL胰岛素；S2中的悬浮细胞培养基包含RPMI1640、10％胎牛血清、1％双抗和0.01mg/mL胰岛素。

10.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞系的建立方法，其特征在于，当所述肿瘤细胞为MCF-7细胞时，S1中的贴壁细胞培养基包含DMEM、10％胎牛血清、1％双抗和0.01mg/mL胰岛素；S2中的贴壁细胞培养基包含RPMI1640、10％胎牛血清、1％双抗和0.01mg/mL胰岛素。