[发明专利]虎脂肪间充质干细胞培养液和虎脂肪间充质干细胞的培养方法

说明书

本发明提供了一种虎脂肪间充质干细胞培养液和虎脂肪间充质干细胞的培养方法。每100mL所述虎脂肪间充质干细胞培养液包含5mL～15mL胎牛血清、0.5mL～1.5mL双抗、0.5mL～1.5mL谷氨酰胺、400ng～600ng TGF‑a和400ng～600ng PGE1，以及细胞基础培养液。与传统技术相比，本发明具备如下有益效果：本发明提供的培养液配方，适用于虎脂肪间充质干细胞的原代培养，填补了脂肪间充质干细胞在虎这一物种上的研究空白，为虎脂肪间充质干细胞体外培养、建系和应用奠定了基础，为后续临床疾病研究提供了新思路。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种虎脂肪间充质干细胞培养液 和虎脂肪间充质干细胞的培养方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesnchymal Stem Cells，MSCs)是一类具有多向分化能 力的成体干细胞，在特定条件下可定向分化为肌肉、软骨、血管、内皮和 神经等多种细胞，是目前最具有临床应用前景的一类成体干细胞。已有多 项研究证明间充质干细胞在心血管疾病、血液疾病、关节损伤等疾病的治 疗中具有显著效果。其中，脂肪来源的间充质干细胞具有材料易得、免疫 原性低、增殖速度快等优点，并且在疾病治疗中避免了伦理和道德上的争议，是一种最佳治疗种子细胞，具有广阔的市场前景。

目前，对人类间充质干细胞(包括脂肪来源的间充质干细胞)的研究 较为深入，但是对虎脂肪间充质干细胞的研究却鲜有报道。如何获得虎脂 肪间充质干细胞是亟待解决的技术问题。

发明内容

基于此，本发明的目的之一是提供一种细胞培养液，该细胞培养液适 用于虎脂肪间充质干细胞的原代培养。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种虎脂肪间充质干细胞培养液，每100mL所述虎脂肪间充质干细胞 培养液包含10mL～15mL胎牛血清、0.5mL～1.5mL双抗溶液、0.5mL～1.5mL谷氨酰胺溶液、400ng～600ngTGF-a和400ng～600ng PGE1，以及 细胞基础培养液，所述双抗溶液包含0.08U/L～0.12U/L青霉素和0.08μ g/L～0.12μg/L链霉素，所述谷氨酰胺溶液包含1mmol/L～3mmol/L谷氨酰胺。

在其中一个实施例中，每100mL所述虎脂肪间充质干细胞培养液包含 10mL～12mL胎牛血清、0.8mL～1.2mL双抗溶液、0.8mL～1.2mL谷氨酰 胺溶液、450ng～550ng TGF-a和400ng～600ng PGE1，以及细胞基础培养 液。

在其中一个实施例中，所述细胞基础培养液包含a-MEM液体培养基。

一种虎脂肪间充质干细胞的培养方法，所述培养方法包括采用所述的 细胞培养液对虎脂肪间充质干细胞进行培养的步骤。

在其中一个实施例中，所述虎脂肪间充质干细胞来源于孟加拉虎。

在其中一个实施例中，培养的阶段为原代培养和/或传代培养。

在其中一个实施例中，获取所述虎脂肪间充质干细胞的步骤包括：采 用胶原酶液对虎脂肪组织进行消化。

在其中一个实施例中，所述胶原酶的种类为Ⅰ型胶原酶。

在其中一个实施例中，消化的条件包括：消化温度为36.5℃～37.5℃， 消化时长≥30min。

在其中一个实施例中，所述胶原酶液的体积是虎脂肪组织的体积的8 倍～12倍，所述胶原酶液含胶原酶的质量百分比为0.8％～1.2％。

在其中一个实施例中，所述虎脂肪组织经双抗溶液浸泡后再采用所述 胶原酶液消化。