[发明专利]一种纳豆激酶包埋物的制备方法

说明书

本发明提供一种纳豆激酶包埋物的制备方法，包括以下步骤：先采用粉碎后膨化谷物作为芯材载体，对纳豆激酶进行吸附，再用海藻酸钠与果胶、黄原胶、结冷胶、蜂胶等几种材料复合作为第一层包被壁材，玉米醇溶蛋白作为第二层包被壁材制备了一种双层包埋的纳豆激酶微胶囊，该纳豆激酶微胶囊具有高包埋率和和保存率。本发明的纳豆激酶微胶囊的制备方法工艺简单，耗时短，损耗低，能较大程度提高原料的利用率，减少纳豆激酶在制备过程中的损耗。

技术领域

本发明涉及蛋白质的包埋及缓释技术领域，具体是一种纳豆激酶包埋物的制备方法。

背景技术

纳豆激酶是一种能有效溶解人工血栓的碱性丝氨酸蛋白酶，在合适的条件下具有强大的纤维蛋白溶解活性,和目前临床上用于治疗血栓的药物尿激酶等相比，这种酶溶栓效果更加明显，且没有毒副作用。近年来，纳豆激酶由于其强大的溶栓作用受到了广泛的关注。根据研究发现，纳豆激酶的溶栓作用主要是通过自身可直接将纤维蛋白溶解成小分子肽、氨基酸等，刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂(t-AP)，激活体内尿激酶原转变为尿激酶，使纤溶酶原激活剂的抑制剂(PAI-1)降解和失活，从而调控纤溶作用这四个方面直接或间接来达到目的。纳豆激酶除了有溶解血栓这一功效，还具有抗高血压、降血脂、抗血小板、改善血液循环的作用，在维持甲状腺健康方面也起着重要作用，并被证明可以作为一种哮喘替代治疗方案。因此，将纳豆激酶作为一种新型溶栓药物或特殊膳食开发是很有前景的。但纳豆激酶在应用过程中会有一定限制。纳豆激酶的稳定性容易受到温度、pH、金属离子、小分子化合物以及有机物等的影响。纳豆激酶在pH为5.0～12.0之间时比较稳定，pH低于3时会迅速失活。而在正常情况下，人体胃酸pH值在0.9～1.8之间，胃液在饭后被稀释，pH值会上升到3.5左右，纳豆激酶若直接经过口服食用，会遭到胃部强酸的影响，导致其空间结构破坏，从而暴露出更多的胃蛋白酶结合位点，丧失溶栓活性。另外人体胃部消化一般需要两个小时，这就要求对纳豆激酶采取一定措施来保护其在胃部免受强酸的影响。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种纳豆激酶包埋物的制备方法，工艺简单，耗时短，损耗低，能较大程度提高原料的利用率，减少纳豆激酶在制备过程中的损耗，且得到的纳豆激酶微胶囊具有高包埋率和和保存率。

本发明提供的技术方案：一种纳豆激酶包埋物的制备方法，包括如下步骤：

(1)纳豆激酶液的制备：将纳豆芽孢杆菌置于液态LB培养基中进行液态发酵，发酵液冷冻离心后，上清液即纳豆激酶粗酶液，将纳豆激酶粗酶液通过超滤膜超滤后，得到纳豆激酶液；

(2)低膨化度谷物原料的制备：取谷物原料按物料含水量为10～20％，调整谷物中的水量，搅拌均匀后倒入双螺旋挤压膨化机中进行挤压膨化，膨化后的谷物干燥后粉碎备用；

(3)膨化谷物负载纳豆激酶：按照粉碎后的膨化谷物与纳豆激酶液质量比为0.1～2:1，将纳豆激酶液加到粉碎后的膨化谷物中，搅拌均匀，得到负载纳豆激酶的膨化谷物混合物；

(4)微胶囊制备：采用二次包被，第一层包被材料采用质量浓度为0.1％～5％的复合海藻酸钠胶类溶液，按照第一层包被材料与步骤(3)得到的混合物的质量比为1:1～5将上述包被材料加入步骤(3)中的混合物中，搅拌均匀，干燥粉碎；随后与玉米醇溶蛋白乙醇溶液按质量比1～10:1进行第二层包被，干燥后得到纳豆激酶微胶囊。

进一步的，所述步骤(1)中纳豆激酶液的制备方法如下：将纳豆芽孢杆菌置于液态LB培养基中进行液态发酵，将发酵液于4～15℃条件下，6000～12000r/min冷冻离心10～30min，上清液即纳豆激酶粗酶液，然后将纳豆激酶粗酶液先通过1万的超滤膜，将截留液再通过3万的超滤膜，此时的透过液即为待包被的纳豆激酶液。

进一步的，所述步骤(1)中得到的纳豆激酶液的纳豆激酶分子量为27000～28000。