[发明专利]一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法

权利要求书

1.一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

S1将利用细菌识别元件修饰后的磁珠加入待测样品中，得到磁珠/食源性致病菌复合物；

S2向磁珠/食源性致病菌复合物中加入细菌识别元件修饰后的低生物背景信号放大型拉曼探针，得到磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探针复合物；

S3向磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探针复合物中加入拉曼探针裂解液，得到拉曼报告物溶液，将拉曼报告物溶液与拉曼光谱增强基底混合，采集混合液的表面增强拉曼光谱，根据光谱中报告物的信号强度计算待测样品中食源性致病菌的含量。

2.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述修饰磁珠的细菌识别元件为抗菌肽。

3.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述磁珠与待测样品的体积比为1:1～1:3，在室温下反应30min～60min。

4.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述低生物背景信号放大型拉曼探针由载体和拉曼报告物构建得到，其中所述载体为三维金属有机框架材料，平均粒径≤200nm；所述拉曼报告物为含有炔基和苯环结构的化合物。

5.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述修饰低生物背景信号放大型拉曼探针的细菌识别元件为单克隆抗体和多克隆抗体。

6.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S2中，步骤S1得到的磁珠/食源性致病菌复合物与500μL～1000μL浓度为5mg/mL低生物背景信号放大型拉曼探针混合后在室温下反应30min～60min。

7.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述拉曼探针裂解液为1M氢氧化钠溶液，用量为100μL～200μL。

8.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S3中，按照体积比1:3～2:1向拉曼报告物溶液中加入拉曼光谱增强基底，在室温下反应5min～30min后，采集混合液的表面增强拉曼光谱。

9.根据权利要求8所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述拉曼光谱增强基底为液态增强基底。

10.根据权利要求1所述的一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，其特征在于，步骤S3中，使用便携式拉曼光谱仪采集混合液的表面增强拉曼光谱，检测条件为：激光波长785nm，功率160mW～320mW，曝光时间3s～6s，拉曼位移300cm^-1～3100cm^-1。