[发明专利]一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法

说明书

本发明提供一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，具体步骤如下：将利用细菌识别元件修饰后的磁珠加入待测样品中，得到磁珠/食源性致病菌复合物；向磁珠/食源性致病菌复合物中加入细菌识别元件修饰后的低生物背景信号放大型拉曼探针，得到磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探针复合物；向磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探针复合物中加入拉曼探针裂解液，得到拉曼报告物溶液，将拉曼报告物溶液与拉曼光谱增强基底混合，采集混合液的表面增强拉曼光谱，根据光谱中报告物的信号强度计算待测样品中食源性致病菌的含量，本发明的检测方法避免了食品基质对拉曼检测的干扰，提高了方法的特异性和灵敏度，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体属于一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法。

背景技术

食源性致病菌污染是引起我国食品安全问题的重要因素。食源性致病菌的快速检测方法和技术，是预防和控制食源性疾病爆发的技术关键，也是保障食品安全的重要技术支撑。然而现有的食源性致病菌检测方法存在依赖増菌、操作步骤繁琐、对检测人员专业素质要求高等局限性，很难满足食品行业自检及食品安全部门监管的需求。因此，亟需构建一种操作简便、灵敏度高、用时短的食源性致病菌检测方法。

表面增强拉曼光谱(SERS)技术是一种强有力的光学检测技术，具有样品前处理简单、响应速度快、指纹识别、半峰宽窄、操作简便、可用于现场检测等优点，在食源性致病菌检测中备受关注。而且，随着便携式拉曼光谱仪性能的不断提升，SERS技术在食源性致病菌现场检测中的潜力被不断发掘，该技术无需昂贵的设备和专业的测试人员，真正实现了食源性致病菌的简便、快速检测。然而，由于食品基质复杂，其中致病菌的种类多样、含量很低，SERS基底或SERS标签结合食源性致病菌的选择性差，现有SERS方法在食源性致病菌检测中存在易受干扰、特异性差、灵敏度低的瓶颈问题。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，采用了低生物背景干扰的信号放大型拉曼探针，探针的特异性强、单色性好，避免了食品基质对拉曼检测的干扰，大大提高了方法的特异性；同时拉曼探针具有信号放大效果，有效提高了方法的灵敏度，具有良好的应用前景。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种食源性致病菌的免培养高灵敏拉曼检测方法，具体步骤如下：

S1将利用细菌识别元件修饰后的磁珠加入待测样品中，得到磁珠/食源性致病菌复合物；

S2向磁珠/食源性致病菌复合物中加入细菌识别元件修饰后的低生物背景信号放大型拉曼探针，得到磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探针复合物；

S3向磁珠/食源性致病菌/低生物背景拉曼探针复合物中加入拉曼探针裂解液，得到拉曼报告物溶液，将拉曼报告物溶液与拉曼光谱增强基底混合，采集混合液的表面增强拉曼光谱，根据光谱中报告物的信号强度计算待测样品中食源性致病菌的含量。

进一步的，步骤S1中，所述修饰磁珠的细菌识别元件为抗菌肽。

进一步的，步骤S1中，所述磁珠与待测样品的体积比为1:1～1:3，在室温下反应30min～60min。

进一步的，步骤S2中，所述低生物背景信号放大型拉曼探针由载体和拉曼报告物构建得到，其中所述载体为三维金属有机框架材料，平均粒径≤200nm；所述拉曼报告物为含有炔基和苯环结构的化合物。

进一步的，步骤S2中，所述修饰低生物背景信号放大型拉曼探针的细菌识别元件为单克隆抗体和多克隆抗体。

进一步的，步骤S2中，步骤S1得到的磁珠/食源性致病菌复合物与500μL～1000μL浓度为5mg/mL低生物背景信号放大型拉曼探针混合后在室温下反应30min～60min。

进一步的，步骤S3中，所述拉曼探针裂解液为1M氢氧化钠溶液，用量为100μL～200μL。