[发明专利]一种携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株，其特征在于，

所述重组流感病毒株为携带狂犬病毒基因的流感病毒载体通过反向遗传系统在细胞中拯救出的携带狂犬病毒基因的重组流感病毒；

所述狂犬病毒基因位于甲型流感病毒NA片段的开放阅读框内：所述狂犬病毒基因片段的5’端通过自剪接多肽与甲型流感病毒NA片段3端’连接；所述狂犬病毒基因片段的3’端连接包装信号，所述包装信号的序列为NA开放阅读框3’端157bp的同义序列；所述自剪接多肽为T2A或P2A。

2.根据权利要求1所述的一种携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株，其特征在于，所述流感病毒载体包括A型流感病毒A/WSN/33或A/PR/8/34中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株，其特征在于，所述狂犬病毒基因片段包括狂犬病毒糖蛋白的全基因或优势表位；所述狂犬病毒基因片段包括PHD结构域，其编码基因序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求1所述的一种携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株，其特征在于，所述包装信号序列的编码核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.权利要求1-4任一项所述的携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株在制备狂犬病毒疫苗中的应用以及在利用鸡胚或细胞作为生物反应器生产狂犬病毒蛋白中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述疫苗包括权利要求1-3任一项所述的携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株的病毒载体疫苗或权利要求1-3任一项所述的携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株利用鸡胚或细胞作为生物反应器所表达的狂犬病毒蛋白制备成的亚单位疫苗。

7.一种携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

获得甲型流感病毒NA片段和狂犬病毒基因片段；

将所述狂犬病毒基因片段通过自剪接多肽连接于所述甲型流感病毒NA片段的开放阅读框内，获得5’-3’方向分别为NA、自剪接多肽、狂犬病毒基因片段和包装信号的重组NA质粒；

将所述重组NA质粒和WSN的其他七个质粒共转染宿主细胞，获得携带狂犬病毒基因的重组流感病毒株。

8.一种狂犬病毒蛋白，其特征在于，编码所述狂犬病毒蛋白的核苷酸序列如SEQ IDNO：3所示。

9.一种编码权利要求8所述狂犬病毒蛋白的核酸分子。

10.一种生物材料，其特征在于，所述生物材料包括表达载体、包含所述表达载体的细胞系或重组菌，所述表达载体包含有权利要求8所述的核酸分子，所述细胞系包括293T、COS细胞和MDCK中的一种。