[发明专利]一种用于抑制无乳链球菌的生防菌剂及其制备方法、应用

说明书

本发明提出了一种用于抑制无乳链球菌的生防菌剂，包括如下重量份的组分：20‑40份耐硼赖氨酸芽孢杆菌发酵液和8‑12份辅料，其中，辅料为水、培养基、甘油中的至少一种，耐硼赖氨酸芽孢杆菌发酵液是由耐硼赖氨酸芽孢杆菌经过二次发酵培养所得。本发明的用于抑制无乳链球菌的生防菌剂，可有效抑制无乳链球菌的生长，发酵液在36h抑制率可达49.5％以上，可用于预防或治疗无乳链球菌引起感染疾病的应用中，尤其是可有效地预防或治疗无乳链球菌感染的罗非鱼链球菌病。耐硼赖氨酸芽孢杆菌不仅可以很大程度上降低无乳链球菌的感染，而且对生态环境没有影响，有望作为合成生物学研究的优质底盘微生物，为无乳链球菌的防治带来新的方向。

技术领域

本发明涉及生防菌应用技术领域，特别涉及一种用于抑制无乳链球菌的生防菌剂及其制备方法、应用。

背景技术

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)又称B群链球菌(GBS)，是一种机会性病原体，对人类具有极强的致病能力。主要感染人群为老年人，免疫力低下的人，尤其是新生儿。无乳链球菌极易在孕妇阴道内定植，从而引起宫内感染，是新生儿败血症，肺炎，脑膜炎以及心内膜炎等疾病的主要病因，具较高的致死率。同时，无乳链球菌也是导致罗非鱼链球菌病的主要病原菌。目前的治疗方法如下：

抗生素疗法为目前的主要治疗方法。预防新生儿和母亲GBS疾病的策略包括产前抗生素预防及孕晚期向母亲接种GBS疫苗。抗生素预防及治疗首选青霉素G，其次可选择红霉素、氯霉素、克林霉素、氧氟沙星、万古霉素、氟喹诺酮类等抗生素，但这些抗生素仅在对青霉素或头孢菌素过敏且已确定生物体易感性的情况下才可用于治疗。然而，目前研究表明GBS对克林霉素，红霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性正在上升，对万古霉素的耐药性也已有报道，这使对青霉素或头孢菌素过敏患者的治疗出现了很大的问题。

因此，近年来科学家们正努力寻找和开发可替代传统抗生素疗法的新方法。其中某些微生物产生的具广谱活性，快速的杀灭动力学，低水平的诱导抗性和对宿主具低毒性的次级代谢产物被认为可用于治疗无乳链球菌的感染。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提出一种用于抑制无乳链球菌的生防菌剂及其制备方法、应用，解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种用于抑制无乳链球菌的生防菌剂，包括如下重量份的组分：20-40份耐硼赖氨酸芽孢杆菌发酵液和8-12份辅料；其中，耐硼赖氨酸芽孢杆菌发酵液是由耐硼赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus boronitolerans)经二次发酵培养所得。

进一步说明，耐硼赖氨酸芽孢杆菌发酵液是由耐硼赖氨酸芽孢杆菌加入聚谷氨酸，经二次发酵培养所得。

进一步说明，耐硼赖氨酸芽孢杆菌发酵液的制备方法，包括如下步骤：

(1)取耐硼赖氨酸芽孢杆菌1-2环，接种至种子培养液，以120-180r/min、36-38℃活化培养12-16h，得活化菌液；

(2)按体积比为2：5，取活化菌液接种至增殖培养液，以120-180r/min、36-38℃增殖培养至菌液OD₆₀₀值为4.8-2.5，得增殖菌液；

(3)按体积比为2：7，取增殖菌液接种至发酵培养液，35-36℃发酵培养4-6h后，以发酵培养液计，加入0.02-0.04wt％聚谷氨酸，35-36℃发酵培养6-8h，得发酵菌液；

(4)将发酵菌液以7000-9000r/min离心8-12min，取上清液，0.20-0.24μm滤膜过滤，得耐硼赖氨酸芽孢杆菌发酵液。

进一步说明，种子培养液包括以下组分：4.8-5.2g/L酵母提取物、9.5-10.5g/L胰化蛋白胨和9.5-10.5g/L氯化钠，pH值7.0-7.2；