[发明专利]对包含在溶液样品中的曲伏前列素和曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法

权利要求书

1.对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法，该方法的特征在于所述定量分析是采用高效液相色谱串联质谱联用技术进行的，所述高效液相色谱串联质谱联用技术优选是高效液相色谱串联二级质谱联用技术。

2.根据权利要求1的方法，其中所述溶液样品是通过包括以下步骤的方法获得的：

i.对动物给药曲伏前列素，并在给药后从所述动物提取动物组织；

ii.在约0℃至约4℃的温度下将得自步骤i的动物组织放置于含有酶抑制剂和pH调节剂的水溶液中并进行生物样品前处理，经离心后取上清液样品，所述上清液样品的pH值为约4.0至约6.0，优选约5.0，所述pH调节剂优选包含柠檬酸；

iii.向得自步骤ii的样品中添加乙氧苯柳胺和曲伏前列素酸-D4并将其充分混合溶解，iv.向得自步骤iii的样品中添加有机溶剂并将其充分混合，其中所述得自步骤iii的样品与所述有机溶剂的体积比例为约1:2至约1:9，优选约1:4，所述有机溶剂优选包含乙腈、甲醇、乙醇或它们的任意混合物，最优选包含乙腈，混合后的样品在离心后取上清液作为所述溶液样品。

3.根据权利要求1的方法，其中所述溶液样品是通过包括以下步骤的方法获得的：

i'.从未给药曲伏前列素的动物提取动物组织；

ii'.在约0℃至约4℃的温度下将得自步骤i'的动物组织进行生物样品前处理，经离心后取上清液，加入酶抑制剂、曲伏前列素、曲伏前列素酸和pH调节剂，所述样品的pH值为约4.0至约6.0，优选约5.0，所述pH调节剂优选包含柠檬酸；

iii'.向得自步骤ii'的样品中添加乙氧苯柳胺和曲伏前列素酸-D4并将其充分混合溶解；

iv'.向得自步骤iii'的样品中添加有机溶剂并将其充分混合，其中所述得自步骤iii'的样品与所述有机溶剂的体积比例为约1:2至约1:9，优选约1:4，所述有机溶剂优选包含乙腈、甲醇、乙醇或它们的任意混合物，最优选包含乙腈，混合后的样品在离心后取上清液作为所述溶液样品。

4.根据权利要求3的方法，其中在步骤ii'中的上清液样品中曲伏前列素的浓度为约10至约1000ng/mL，曲伏前列素酸的浓度为约2至约200ng/mL。

5.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中所述动物组织包括房水、血浆或全血。

6.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中所述酶抑制剂包含敌敌畏、对氧磷、苯甲基黄酰氟、毒扁豆碱以及它们中的一种或多种的组合，尤其优选包含对氧磷。

7.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中在步骤ii或ii'中的上清液中的酶抑制剂的浓度为约1至约20mM，优选约2至约10mM，更优选约5mM。

8.根据权利要求2至4中任一项的方法，其中在步骤iii或iii'中，在所述混合后的样品中的乙氧苯柳胺的浓度优选为约50至约200ng/mL，优选为约100ng/mL，和曲伏前列素酸-D4的浓度为约10ng/mL至约30ng/mL，优选为约20ng/mL。