[发明专利]对包含在溶液样品中的曲伏前列素和曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法

说明书

本发明公开了对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法，该方法的特征在于所述定量分析是采用高效液相色谱‑二级质谱联用技术进行的。本发明的方法具有以下优点：操作简便、灵敏、快速、特异性高、专属性强、准确度高、重现性好、分析时间短。采用本发明的方法可得到样品峰形及色谱保留时间令人满意的色谱图，其特别使得能够实现对添加了酶抑制剂的生物组织样品中的曲伏前列素和其活性代谢物曲伏前列素酸同时进行定量分析，并因此能够计算出所述酶抑制剂对曲伏前列素的转化率的影响。

技术领域

本发明涉及药代动力学研究领域。具体地，本发明涉及对在溶液样品中的药物进行定量分析的方法，更具体地，本发明涉及对包含在溶液样品中的曲伏前列素和曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法。

背景技术

曲伏前列素是一种前列腺素F2α类似物，可用于治疗开角型、闭角型青光眼以及高眼压症。它是一种高选择性和高亲和力的前列腺素FP受体完全激动剂，通过增加经由葡萄膜巩膜通路的房水外流的机制减低眼内压。它是曲伏前列素酸的酯类前体药(曲伏前列素酸异丙酯)，通过角膜吸收，能很快被角膜酯酶水解成具有生物学活性的游离曲伏前列素酸，并发挥其降眼压作用。曲伏前列素和曲伏前列素酸的结构式如下所示：

曲伏前列素

曲伏前列素酸

在药物的药代动力学研究过程中，经常需要对包含在溶液样品中的药物进行快速定量分析。在本发明情况下，所述溶液样品除了化学领域中一般意义上的溶液外，尤其包括得自生物体的生物样品。

通常情况下，生物样品的采集过程本身会对药物的定量测定结果产生影响。例如，为了研究药物在动物眼组织中的药代动力学，需要采集动物眼组织。由于眼球的生物屏障会在动物死亡后立即消失，而眼组织中的酶在眼球被摘除后仍能发挥生物活性，因此眼球在解剖过程中经常需要保持冷冻状态，并对样品进行快速测定。

实验表明，将曲伏前列素分别添加到兔房水、血浆和全血中并在涡旋后于约4℃下放置约2小时，曲伏前列素分别在房水中降解约30％，在全血和血浆中降解甚至高达约80％。

本发明的发明人已经通过在包含曲伏前列素的生物样品中添加酶抑制剂实现了对曲伏前列素在生物样品采集过程中和采集之后的生物样品处理过程中发生降解的控制。所述酶抑制剂可以包含甲基磺酰氟、毒扁豆碱、敌敌畏、对氧磷或上述物质的任意混合物。本发明的发明人还研究了不同的酶抑制剂、酶抑制剂浓度、温度和pH条件等多种因素对曲伏前列素在生物样品中发生降解的影响，即研究了这些因素对曲伏前列素在生物样品中转化为相应酸的影响。

现有技术中关于对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法尚未有报道，尤其是在向生物样品中添加酶抑制剂后，同时快速测定样品溶液中的曲伏前列素及曲伏前列素酸的生物分析方法尚无文献报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题

本发明的目的就是要提供一种能够同时实现对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸进行快速定量分析的方法。尤其是要提供一种对在包含酶抑制剂的生物样品中的曲伏前列素和其活性代谢物曲伏前列素酸同时进行快速定量分析的方法。所述定量分析方法使得能够研究不同的酶抑制剂、酶抑制剂浓度、温度和pH条件等多种因素对曲伏前列素在生物样品采集过程中和采集之后的生物样品处理过程中转化为曲伏前列素酸的影响。

解决技术问题的技术方案

为了解决所述技术问题，本发明提供以下技术方案：

方案1：对包含在溶液样品中的曲伏前列素及曲伏前列素酸同时进行定量分析的方法，该方法的特征在于所述定量分析是采用高效液相色谱串联质谱联用技术进行的，所述高效液相色谱串联质谱联用技术优选是高效液相色谱串联二级质谱联用技术。

方案2：根据方案1的方法，其中所述溶液样品是通过包括以下步骤的方法获得的：

i.对动物给药曲伏前列素，并在给药后从所述动物提取动物组织；