[发明专利]一种猪传染性胃肠炎病毒及其应用

权利要求书

1.一种猪传染性胃肠炎病毒，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎病毒命名为猪传染性胃肠炎病毒TGEV-HuN，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20279，保藏日期为2021年6月2日。

2.一种权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括：

使用病猪粪便制备病毒粗提液，再将所得病毒粗提液接种在细胞中，培养，收集细胞培养液，得到所述猪传染性胃肠炎病毒。

3.根据权利要求2所述的猪传染性胃肠炎病毒的分离方法，其特征在于，所述病毒粗提液的制备方法包括：

将所述病猪粪便与PBS溶液混合，冷冻融化，震荡后离心，收集上清，即所述的病毒粗提液；

优选地，所述PBS溶液的pH值为7.0～7.8；

优选地，所述冷冻融化的次数为2～4次；

优选地，所述冷冻的温度为-22～-18℃；

优选地，所述融化的温度为35～40℃；

优选地，所述离心的转速为2800～3200rpm；

优选地，所述收集上清后还包括使用过滤器过滤的步骤。

4.根据权利要求2或3所述的猪传染性胃肠炎病毒的分离方法，其特征在于，所述细胞包括ST细胞；

优选地，所述接种的剂量为150～300μL；

优选地，所述培养的温度为35～40℃；

优选地，所述培养的CO₂浓度为4％～7％；

优选地，所述收集细胞培养液在细胞病变率不低于80％时进行。

5.根据权利要求2～4任一项所述的猪传染性胃肠炎病毒的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括：

(1)将病猪粪便与pH值为7.0～7.8的PBS溶液混合，在-18～-22℃下冷冻，在35～40℃下融化，重复2～4次，震荡后在2800～3200rpm下离心，收集上清，使用过滤器过滤，得到所述病毒粗提液；

(2)将所得病毒粗提液接种在ST细胞中，接种的剂量为150～300μL，在35～40℃、4％～7％的CO₂浓度下培养，细胞病变率不低于80％时收集细胞培养液，得到所述猪传染性胃肠炎病毒。

6.权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒和/或权利要求2～5任一项所述的猪传染性胃肠炎病毒的分离方法在制备猪传染性胃肠炎疫苗中的应用。

7.一种猪传染性胃肠炎疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎疫苗包括水相和油相，所述水相中含有灭活或减毒的权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒；

优选地，所述水相中还含有吐温-80；

优选地，所述灭活或减毒的猪传染性胃肠炎病毒与吐温-80的质量比为(23～25):1，优选为24:1。

8.根据权利要求7所述的猪传染性胃肠炎疫苗，其特征在于，所述油相包括白油、司本-80和硬脂酸铝；

优选地，所述白油、司本-80和硬脂酸铝的质量比为(46～50):(1～3):1，优选为48:2:1；

优选地，所述水相和油相的质量比为(0.9～1.1):1，优选为1:1。