[发明专利]一种检测李斯特氏菌的CDA引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种非疾病诊断目的的检测李斯特氏菌的CDA引物组，其特征在于：所述CDA引物组为两对引物，

引物对LM-F2/LM-R2，其中，LM-F2的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示， LM-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示；

引物对LM-MF/LM-MR，其中，LM-MF的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，LM-MR的核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。

2.一种检测李斯特氏菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的CDA引物组。

3.如权利要求2所述的一种检测李斯特氏菌的试剂盒，其特征在于：所述CDA引物组中，引物LM-F2与LM-R2的浓度均为0.2～0.4 μM，引物LM-MF与LM-MR的浓度均为1～2 μM。

4.如权利要求2所述的一种检测李斯特氏菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括Bst聚合酶、CDA反应缓冲液、超纯水、以及显色剂；所述CDA反应缓冲液包括Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄和Triton X-100。

5.如权利要求4所述的一种检测李斯特氏菌的试剂盒，其特征在于：所述显色剂选自Sybr green I、Eva green、羟基萘酚蓝、铬黑T中的一种。

6.如权利要求2所述的一种检测李斯特氏菌的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒反应体系的组成为，

2-50 mM Tris-HCl pH8.8

2-20 mM KCl

2-20 mM (NH₄)₂SO₄

2～20 mM MgSO₄

0.1～0.5 % Triton X-100

0.2～1 M 甜菜碱

1～1.6 mM dNTP

5～10 U Bst DNA 聚合酶

100～150μmol/ L 显色剂

0.2～0.4μM 引物LM-F2

0.2～0.4μM 引物LM-R2

1～2 μM 引物LM-MF

1～2 μM 引物LM-MR；

反应溶剂为超纯水。

7.权利要求6所述的试剂盒用于非疾病诊断目的的检测李斯特氏菌的方法，包括以下步骤：

步骤1，将待检测核酸样本和试剂盒的反应体系混合，制得扩增反应液；

步骤2，上述制得的扩增反应液，于60～65℃反应20～80 min，根据显色结果判断样品是否含有李斯特氏菌。

8.权利要求1所述的CDA引物组在非疾病诊断目的的李斯特氏菌检测中的应用。

9.权利要求2-6任一项所述的试剂盒在非疾病诊断目的的李斯特氏菌检测中的应用。