[发明专利]一种叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白(FA/CAD/HSA)组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白(FA/CAD/HSA)组合物及其制备方法和应用。该组合物是由叶酸、顺式乌头酸酐键阿霉素和人血清白蛋白通过化学偶联而成的靶向给药系统，具有叶酸主动靶向和pH敏感释药功能，能够降低阿霉素毒性，对肿瘤细胞产生强大的杀伤作用。

技术领域

本发明属于靶向药物技术领域，具体涉及阿霉素偶联白蛋白的药物制剂及其制备方法和应用。

背景技术

癌症化疗中面临的一个主要问题是化疗药物缺乏对肿瘤细胞或组织的选择性或靶向性，这样药物容易对正常的细胞和组织造成损害。阿霉素(doxorubicin,DOX)属于蒽环类抗生素，是最有效的细胞毒性药物之一，可用作多种癌症的化疗药物，但同时也会对其他正常细胞和组织，特别是心脏、神经、骨髓产生严重毒副作用，从而限制了其在临床上的使用，因此，肿瘤靶向输送阿霉素在治疗中是必要的。因此需要对阿霉素进行相应处理，设计一种高效的药物靶向递送体系尤为重要。

目前已有公开的对阿霉素的改造研究成果，但是这些方法中都具有多个缺点，例如专利 CN201210503794.4公开了一种负载阿霉素并具有叶酸受体靶向功能的白蛋白纳米粒子制剂及其制备方法，但是该专利所制得的制剂存在阿霉素的包埋率较低的问题，同时该制剂在应用时的体外释放效率也较低，与使用同等剂量的游离DOX相比抗癌效果明显较差，而且高浓度的白蛋白纳米粒毒性也很大，影响了临床应用。再比如专利CN201510385230.9，公开了一种共担载阿霉素和TRAIL的白蛋白纳米粒靶向制剂及制备方法，该专利在制备工艺上使用了戊二醛，可能存在残留问题，如果临床应用会对人体存在安全隐患。因此，需要改善组成结构和制备方法使得组合物的安全性更高以及肿瘤杀伤作用更强，同时使得工艺流程更简便高效。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白 (FA/CAD/HSA)组合物及其制备方法和应用，该组合物具有肿瘤pH敏感释药的特点，在肿瘤酸性环境中的体外释放效率较高，肿瘤杀伤能力较强，且具有叶酸介导的肿瘤主动靶向功能，应用于癌症治疗时可降低阿霉素的心脏毒性，同时本发明的制备工艺中也不存在戊二醛的残留问题和高浓度白蛋白纳米粒毒性问题，而采取了更为简便易行的化学偶联，更适于大规模生产。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白(FA/CAD/HSA)组合物，所述组合物由摩尔比为10～20:5～10:1的叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白制成。

优选的，所述组合物由摩尔比为20:10:1的叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白制成。

本发明还提供了一种叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白(FA/CAD/HSA)组合物的制备方法，所述组合物的制备方法为：首先将顺式乌头酸酐阿霉素(CAD)、1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐(EDCI)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶于pH6-8的磷酸盐缓冲液中，进行第一次避光搅拌反应，然后将溶于pH6-8的磷酸盐缓冲液的人血清白蛋白(HSA) 加入进行第二次搅拌反应，再将溶于二甲基亚砜(DMSO)的叶酸-琥珀酰亚胺酯(FA-NHS) 加入进行第三次搅拌反应，最后离心取上清液，经分离纯化得叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/ 人血清白蛋白(FA/CAD/HSA)组合物。

优选的，所述分离纯化具体为将上清液用25kD透析袋透析24小时，再用SepHadex25 柱分离得叶酸/顺式乌头酸酐键阿霉素/人血清白蛋白(FA/CAD/HSA)组合物。

优选的，所述制备方法中第一次避光搅拌反应4小时，第二次搅拌反应24小时，第三次搅拌反应10小时。

优选的，所述制备方法中的缓冲液为磷酸盐缓冲液。

优选的，所述制备方法中的缓冲液pH为7.4。