[发明专利]用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法在审
| 申请号： | 202111555975.7 | 申请日： | 2021-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN114214390A | 公开（公告）日： | 2022-03-22 |
| 发明（设计）人： | 饶正华;李明;孟庆石;冯潇慧;刘娜;焦京琳;谢秀兰 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京细软智谷知识产权代理有限责任公司 11471 | 代理人： | 刘静荣 |
| 地址： | 100089 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 通量 微生物 饲料添加剂 核酸 提取 方法 | ||
1.用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)取样品，用TE缓冲液清洗样品；
(2)裂解样品中的微生物；
(3)向步骤(2)所得的样品中加入核糖核酸酶，去除样品中的RNA；
(4)向步骤(3)所得的样品中加入蛋白酶，去除样品中的蛋白质；
(5)向步骤(4)所得样品中加入磁珠混合液，吸附细菌DNA，其中，磁珠混合液包括磁珠和PEG，磁珠与PEG的体积比为1：1～4；
(6)清洗步骤(5)所得的DNA。
2.根据权利要求1所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(1)中，用10×TE缓冲液清洗样品。
3.根据权利要求1所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(2)中，向步骤(1)所得样品中加入生理盐水，震荡悬起沉淀，再加入40～60mg/mL溶菌酶混匀，37℃反应0.5～4.5h后，离心，弃清液，收集菌体。
4.根据权利要求3所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(2)中，向收集的菌体中加入锆珠及裂解液，裂解样品中的微生物，其中，样品与裂解液的体积比为1：3～7，所述裂解液的组成为包括1～5％SDS、0.5～10×TE缓冲液及0.3～3M NaCl，裂解液的pH为7.0～9.0。
5.根据权利要求4所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(2)中加入裂解液后，进行研磨震荡，在65～75℃条件下裂解5～200min，离心，取上清液。
6.根据权利要求1所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(3)中，向步骤(2)所得样品中加入终浓度为1～5mg/mL核糖核酸酶，在36.5～37.5℃条件下孵育5分钟-12小时。
7.根据权利要求1所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(4)中，向步骤(3)所得样品中加入终浓度1～5mg/mL蛋白酶K，在65～75℃条件下孵育5分钟-2小时。
8.根据权利要求1所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(5)中，磁珠的终浓度为0.5～5mg/mL。
9.根据权利要求1所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(6)中，依次使用70％乙醇、水对提取的核酸进行清洗和洗脱。
10.根据权利要求1所述的用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，步骤(1)中，使用PCR管量取样品，量取样品的体积为200μL。
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