[发明专利]一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法

权利要求书

1.一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：包括下列步骤：

步骤1：将洗净后的待测肉类样品切成颗粒，然后与三氯乙酸溶液混合，均质后得到混合物，然后对均质后的混合物进行离心，过滤取上清液，得到样品溶液；

步骤2：向样品溶液中加入黄嘌呤氧化酶，反应后得到反应产物；然后向反应产物中加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入Fe-PDA，然后用醋酸-醋酸钠缓冲液将体积定容至200μL，振荡均匀后离心取上清液，测量上清液在653nm处的吸光度；

步骤3：将步骤2得到的吸光度值代入回归方程：

y＝0.00364x+0.20824

式中，x为次黄嘌呤的浓度，y为吸光度值；

当判别鱼肉新鲜度时，

新鲜鱼类：次黄嘌呤的浓度≤3.7×10^-3g/5g；

腐败鱼类：次黄嘌呤的浓度＞3.7×10^-3g/5g；

当判别猪肉新鲜度时，

新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度≤4.75×10^-3g/5g；

不新鲜猪肉：次黄嘌呤的浓度＞4.75×10^-3g/5g；

当判别鱼肉新鲜度时，

新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度≤7.2×10^-3g/5g；

不新鲜鸡肉：次黄嘌呤的浓度＞7.2×10^-3g/5g。

2.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：所述Fe-PDA的制备方法包括：将盐酸多巴胺分散于去离子水中，然后加入FeCl₃，当溶液的颜色从无色变为绿色时，将混合物转移到衬有聚四氟乙烯的高压釜中，密闭后在150-170℃条件下反应2.5-3.5h；高压釜自然冷却至室温后对得到的反应物料进行离心，弃上清后，用去离子水多次清洗沉淀并再次离心，收集沉淀物即为Fe-PDA。

3.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：步骤1中，颗粒的粒径为1.5-2.5mm，三氯乙酸溶液的质量分数为8-12％，均质使用超声波均质机，离心速度为3500-4500r/m。

4.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：步骤1中，黄嘌呤氧化酶的浓度为0.8-1.2mg/mL，反应的时间为35-45min；由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，3，3'，5，5'-四甲基联苯胺溶液的浓度为0.8-1.2mmol/L，醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为0.1mol/L，3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液两者之间的体积比为1：18-20；振荡均匀后在43-47℃条件下反应13-17分钟。

5.根据权利要求1所述的通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，其特征在于：建立次黄嘌呤回归方程的方法包括：将10μL的浓度为1mg/mL的黄嘌呤氧化酶加入100μL含不同浓度梯度的黄嘌呤氧化酶的pH值为8.0，且浓度为5mmol/L的Tris-Hcl缓冲液中，常温下分别反应40min，然后取20μL反应产物加入由3，3’，5，5’-四甲基联苯胺溶液和醋酸-醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入5μL的浓度为2.0mg/mL的Fe-PDA，使用醋酸-醋酸钠缓冲液将总体积定容至200μL，振荡均匀后在45℃反应15分钟，随后，样品在8000rpm离心3分钟，测量上清液在653nm处的吸光度；以吸光度值为纵坐标，黄嘌呤氧化酶的浓度为横坐标，利用Origin软件进行线性方程的拟合，得出黄嘌呤氧化酶的浓度与吸光度值在0-200μmol/L呈线性，回归方程为y＝0.00364x+0.20824，式中x为黄嘌呤氧化酶的浓度，y为吸光度值。