[发明专利]一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法

说明书

一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法，包括：步骤1：将洗净后的待测肉类样品切成颗粒，然后与三氯乙酸溶液混合，均质后得到混合物，然后对均质后的混合物进行离心，过滤取上清液，得到样品溶液；步骤2：向样品溶液中加入黄嘌呤氧化酶，反应后得到反应产物；然后向反应产物中加入由3，3’，5，5’‑四甲基联苯胺溶液和醋酸‑醋酸钠缓冲液混合后得到的混合溶液中，再加入Fe‑PDA，然后用醋酸‑醋酸钠缓冲液将体积定容至200μL，振荡均匀后离心取上清液，测量上清液在653nm处的吸光度；步骤3：将步骤2得到的吸光度值代入回归方程。本发明设计的检测体系简单快速，选择性好，线性范围为5.13‑200μmol/L，检出限为1.54μmol/L，稳定性好且检测成本低。

技术领域

本发明属于肉类检测技术领域，涉及一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法。

背景技术

肉类富含大量的蛋白质和脂肪，是人们餐桌上的常客。在肉类的运输和销售过程中，容易发生一系列生化反应导致腐败变质，最终影响产品的风味口感，降低了营养价值，甚至会产生有毒有害物质引发食品安全问题。因此，研究如何快速获得准确的肉类新鲜度，对于保障肉类食用安全、提高肉类食用品质具有重要意义。新鲜度是肉制品质量的重要的指标之一。动物在死亡后发生了一系列生化反应，包括糖原的酵解和三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)的分解等反应。一般来说，动物在死亡后嘌呤分解代谢如下：三磷酸腺苷→二磷酸腺苷→单磷酸腺苷→肌苷单磷酸→肌苷→次黄嘌呤(Hx)→黄嘌呤(X)→尿酸(UA)。在这个循环中，黄嘌呤(X)、次黄嘌呤(Hx)和尿酸(UA)是分解代谢的最终产物。而且次黄嘌呤(Hx)作为肉类在变质过程中ATP经过一系列反应分解后的产物，在肉类变质的过程中逐渐积累。因此，通过测量次黄嘌呤(Hx)的浓度就可获知肉制品的新鲜度变化情况。次黄嘌呤(Hx)含量的积累也会影响肉制品的味道，降低其鲜度，是肉制品变质过程中的苦味来源。因此，肉制品中次黄嘌呤(Hx)含量的快速准确测定对于检测肉类新鲜度、提升肉制品食用品质具有重要意义。

传统上，有两种评估肉类新鲜度的方法：一个是在专家的帮助下控制感官特征的感官测试，另一个是目标生物指标浓度的化学或生化测定。虽然前一种方法已被证明是快速的，但是很昂贵并且有时不太可靠，因为这种方法很难在降解的初始阶段之前评估肉类新鲜度的细微差异。目前，被广泛应用于检测次黄嘌呤(Hx)浓度的方法主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法等。这些方法需要相对昂贵的设备、熟练的技术人员、繁琐的实验室操作、复杂的合成方案等，不利于广泛应用。与这些方法相比，一些简单、快速的方法，如生物传感器、电子舌、比色卡等引起了研究人员的注意。

授权公告号为CN106855508B的发明专利公开了一种检测鱼中次黄嘌呤含量的方法，其特征在于该检测方法是按下述步骤进行的：步骤一、取5g鱼肉研磨至泥状，离心取上清液，用过滤膜过滤后向用过滤膜过滤的滤液中加入0.1mL质量百分比为10％的三氯醋酸，搅拌混匀，去除沉淀蛋白；骤二、然后离心取上清液，用辣根过氧化物酶和黄嘌呤氧化酶偶联催化，向上清液中依次加入3mL的苯酚、3mL4-氨基安替比林、3mLTris-HCL缓冲液、3mL叠氮钠和3mL辣根过氧化物酶，加100μL黄嘌呤氧化酶和10mL样品液，置于37℃的恒温水浴锅内保温8min，然后煮沸2min后加入1mL浓度为71.389mg/mL的Na₂CO₃溶液，放入冰水中冷却，再用紫外分光光度计进行检测获取次黄嘌呤的含量。

公开号为CN109856102A的发明专利申请公开了一种检测水产品次黄嘌呤的生物传感器的制备方法，所述生物传感器为PtNPs，其是以柠檬酸作为稳定剂，通过硼氢化钠还原氯铂酸制备所得；具体步骤为：将1mL浓度为16mM的氯铂酸水溶液和1mL浓度为40mM的柠檬酸三钠溶液加入到38mL水中并在室温下搅拌30min；然后，向混合物中加入200μL浓度为50mM的硼氢化钠溶液；静置1h后，得到PtNPs的棕色悬浮液，使用前将其保持在4℃，制备得到PtNPs。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过定量检测次黄嘌呤判别肉类新鲜度的方法。