[发明专利]纳米钯片负载妥珠单抗的纳米复合体、制备方法及其在制备治疗炎症相关性贫血药物的应用

说明书

本发明公开了一种纳米钯片负载妥珠单抗的纳米复合体、制备方法及其在制备治疗炎症相关性贫血药物的应用。本发明通过表面修饰PdPL的方式提高其对TCZ的装载能力，由此构建得到PdPL‑PEG@TCZ纳米复合体。PdPL‑PEG@TCZ纳米复合体利用PdPL对肝脏组织被动靶向的特性，将TCZ高效的运输并富集在肝脏组织中，阻断肝脏细胞IL‑6/IL‑6R/JAK2/STAT3/Hepcidin信号通路，从而有效改善小鼠模型的贫血程度，同时可以减少TCZ在其它组织中的分布而诱发的副作用。本发明的PdPL‑PEG@TCZ纳米复合体为治疗AI提供了一种新的手段。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种纳米钯片负载妥珠单抗的纳米复合体、制备方法及其在制备治疗炎症相关性贫血药物的应用。

背景技术

炎症相关性贫血(Anemia of inflammation，AI)的发病率位居全球贫血发病率的第二位。AI在感染性疾病、自身免疫性疾病、慢性肾病、充血性心力衰竭和癌症患者群体中普遍存在，该类疾病患者通常伴随免疫系统的异常激活。AI可对患者多个组织器官的生理机能产生不利影响，特别是对于正在接受化疗和(或)放疗的患者，AI可能加速其肿瘤进程。同时，有研究表明在老年患者(60岁)群体中，AI的存在可显著降低患者的生活质量和生存率。然而，目前用于AI治疗的方法都具有局限性，治疗效果不够理想。因此，寻找有效治疗AI的方法是一个亟需攻克的科学问题。

研究表明，AI的发生与肝脏细胞分泌铁调素(Hepcidin)水平失调密切相关，而白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)是AI患者中诱导肝脏细胞合成分泌Hepcidin的主要驱动因子，IL-6可通过Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(Janus kinase 2/signaltransducer and activator of transcription 3，JAK2/STAT3)信号通路促进肝脏细胞产生Hepcidin来抑制生物体内铁转运蛋白活性，从而减弱十二指肠上皮细胞对食物中铁的吸收，抑制巨噬细胞、肝脏和脾脏等铁储库内铁的释放，继而导致血清中的有效生物铁浓度降低，影响血红蛋白及红细胞的生成，最终导致贫血的发生。妥珠单抗(Tocilizumab，TCZ)是一种IL-6受体(Interleukin-6Receptor，IL-6R)单克隆抗体，因其可有效阻断IL-6/IL-6R/JAK2/STAT3/Hepcidin级联信号转导通路而被应用于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等免疫相关性疾病的临床治疗中。但是，TCZ经血液进入体内后会分布至全身组织器官，降低了靶器官肝脏组织中的有效药物浓度，同时也会诱发全身其它组织器官的副作用。因此，需要寻求一种有效的方法提高TCZ在肝脏组织中的靶向富集浓度，以此来提高其治疗AI的效果，降低药物的副作用。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，提供了一种纳米钯片负载妥珠单抗的纳米复合体、制备方法及其在制备治疗炎症相关性贫血药物的应用。

第一方面，本发明提供了一种纳米钯片负载妥珠单抗的纳米复合体的制备方法，是采用以下技术方案实现的。

一种纳米钯片负载妥珠单抗的纳米复合体的制备方法，包括以下步骤：

S1.将纳米钯片与巯基丙酸混合，孵育3-3.5小时，巯基丙酸的加入量为200-300μL/mg纳米钯片；离心并洗涤沉淀后，将沉淀再次分散，然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，孵育1-1.5小时，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺和巯基丙酸的体积比为(2-3):(2-3):8；再加入NH₂-PEG并孵育3-3.5小时，NH₂-PEG与纳米钯片的质量比为(4-6):3；将离心得到的沉淀进行超滤、洗涤并重新分散得到PEG修饰的纳米钯片；

S2.将步骤S1得到的PEG修饰的纳米钯片与妥珠单抗混合，孵育过夜，PEG修饰的纳米钯片与妥珠单抗的质量比为(1-2):1；离心、洗涤并重悬沉淀，得到纳米钯片负载妥珠单抗的纳米复合体。