[发明专利]联合检测多种肠道病毒的试剂盒、引物探针组合物及方法

权利要求书

1.一种联合检测多种肠道病毒的试剂盒，其特征在于，包括第一核酸反应和第二核酸反应液，所述第一核酸反应液包括针对诺如病毒GI群及GII群、及札如病毒的正向引物、反向引物和探针，所述第二核酸反应液包括针对轮状病毒A组及B组、及星状病毒的正向引物、反向引物和探针，所述第一核酸反应液中：

诺如病毒GI群的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示；

诺如病毒G2群的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～6所示；

札如病毒的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～9所示；

所述第二核酸反应液中，

轮状病毒A组的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.10～12所示；

轮状病毒B组的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.13～15所示；

星状病毒的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.16～18所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一核酸反应液及所述第二核酸反应液还分别包括：

RNase P内参基因的正向引物、反向引物和探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.19～21所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一核酸反应液中，诺如病毒的探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ1荧光淬灭基团；札如病毒的探针的5’端标记有HEX荧光报告基团，3’端标记有BHQ1荧光淬灭基团；内参基因的探针的5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ2荧光淬灭基团；

所述第二核酸反应液中，轮状病毒的探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ1荧光淬灭基团；星状病毒的探针的5’端标记有HEX荧光报告基团，3’端标记有BHQ1荧光淬灭基团；内参基因的探针的5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ2荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的判读标准为：

第一核酸反应液中，若FAM通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤38，则判断诺如病毒阳性；若FAM通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct＞38且CY5通道Ct≤38，则判断诺如病毒阴性；若HEX通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤38，则判断札如病毒阳性；若HEX通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct＞38且CY5通道Ct≤38，则判断札如病毒阴性；

第二核酸反应液中，若FAM通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤38，则判断轮状病毒阳性；若FAM通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct＞38且CY5通道Ct≤38，则判断轮状病毒阴性；若HEX通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤38，则判断星状病毒阳性；若HEX通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct＞38且CY5通道Ct≤38，则判断星状病毒阴性。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括2×Fast RT-qPCRbuffer和RT酶mix。

6.一种联合检测多种肠道病毒的引物探针组合物，其特征在于，包括：

诺如病毒GI群的正向引物、反向引物及探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示；

诺如病毒G2群的正向引物、反向引物及探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～6所示；

札如病毒的正向引物、反向引物及探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～9所示；

轮状病毒A组的正向引物、反向引物及探针，其核苷酸序列依次如如SEQ ID NO.10～12所示；

轮状病毒B组的正向引物、反向引物及探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.13～15所示；

星状病毒的正向引物、反向引物及探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.16～18所示。