[发明专利]联合检测多种肠道病毒的试剂盒、引物探针组合物及方法

说明书

本发明公开了一种联合检测多种肠道病毒的试剂盒、引物探针组合物及方法。该试剂盒包括第一核酸反应和第二核酸反应液，第一核酸反应液中，诺如病毒GI群的引物对及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3；诺如病毒G2群的引物对及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～6；札如病毒的引物对及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～9；第二核酸反应液中，轮状病毒A组的引物对及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.10～12；轮状病毒B组的引物对及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.13～15；星状病毒的引物对及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.16～18。本发明能够联合检测诺如病毒、札如病毒、轮状病毒及人类星状病毒，且具有较高的特异性和灵敏度。

技术领域

本发明属于肠道病毒检测试剂盒领域，涉及一种联合检测多种肠道病毒的试剂盒、引物探针组合物及方法，特别是一种联合检测诺如病毒、札如病毒、轮状病毒及人类星状病毒的试剂盒。

背景技术

病毒性胃肠炎又称病毒性腹泻，是一组由多种病毒引起的急性肠道传染病。临床特点为起病急、恶心、呕吐、腹痛、腹泻，排水样便或稀便，也可有发热及全身不适等症状，病程短，病死率低。各种病毒所致胃肠炎的临床表现基本类似。与急性胃肠炎有关的病毒种类较多，其中引起病毒性腹泻主要的病毒有诺如病毒(Norovirus，简称NV)，轮状病毒(Rotavirus，简称RV)，札如病毒(Sapovirus，简称SaV)，人类星状病毒(HumanAstroviruses，简称HAstVs)。

诺如病毒直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，目前不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物感染模型；基因组为全长约7.7k的单股正链RNA。根据其病毒VP1蛋白序列的同源性，诺如病毒可分为GI～GV五个基因群(Genogroup)，其中引起人类感染的主要是GI和GII群。

轮状病毒是一种双链核糖核酸病毒，属于呼肠孤病毒科。它是婴儿与幼儿腹泻的单一主因，几乎世界上每个大约五岁的小孩都曾感染过轮状病毒至少一次。轮状病毒总共有七种，分别以英文字母编号为A、B、C、D、E、F与G等。人类主要是受到轮状病毒A种、B种与C种的感染，而其中最常见的是轮状病毒A种的感染。

札如病毒也称札幌病毒，与诺如病毒类似，同属人类杯状病毒，是引起非菌性急性胃肠炎暴发的主要病因，也是仅次于轮状病毒引起婴幼儿急性腹泻的常见病原。

人星状病毒于1975年从腹泻婴儿粪便中分离得到，经粪-口传播，是引起婴幼儿、老人等急性病毒性肠炎的主要病原体之一。

目前虽已有采用PCR荧光探针法检测某些肠道病毒，但未见报道针对诺如病毒、札如病毒、轮状病毒及人类星状病毒等四种肠道病毒的联合检测PCR方案。尽管有些文献提供能够检测多种肠道病毒的方案，但特异性较低。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种联合检测多种肠道病毒的试剂盒、引物探针组合物及方法，能够联合检测诺如病毒、札如病毒、轮状病毒及人类星状病毒，且具有较高的特异性和灵敏度。

根据本发明第一个方面，一种联合检测多种肠道病毒的试剂盒，包括第一核酸反应和第二核酸反应液，所述第一核酸反应液包括针对诺如病毒GI群及GII群、及札如病毒的正向引物、反向引物和探针，所述第二核酸反应液包括针对轮状病毒A组及B组、及星状病毒的正向引物、反向引物和探针，所述第一核酸反应液中：

诺如病毒GI群的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示；

诺如病毒G2群的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～6所示；

札如病毒的正向引物、反向引物及探针的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～9所示；

所述第二核酸反应液中，