[发明专利]一种怀牛膝多糖、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种怀牛膝均一多糖AB‑1‑1，由果糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖及阿拉伯糖组成，由T‑α‑D‑Glcp、→1)‑β‑D‑Fruf‑(2→、→2)‑β‑D‑Fruf‑(6→、→1，6)‑β‑D‑Fruf‑(2→和β‑D‑Fruf‑(2→，五种糖苷键连接，重均分子量为3.998×10³Da(±3.936％)，特性黏度值为4.34mL/g(±2.03％)；所述均一多糖的制备方法，包括多糖提取、脱蛋白冻干、柱分离和洗脱干燥而得；本发明还提供了该均一多糖AB‑1‑1在制备抑制胰脂肪酶活性药物及减肥药物中的应用；本发明所述的均一多糖，化学组成清晰，毒副作用小，具有显著的抑制胰脂肪酶活性。

技术领域

本发明涉及天然药化领域，尤其涉及一种怀牛膝多糖，还涉及其制备方法及应用。

背景技术

目前肥胖已经成为全球性的健康问题，其特征在于脂肪量的增加，脂肪细胞增生和肥大导致的脂肪组织功能障碍。哺乳动物进食的脂肪一般会通过胰脂肪酶水解后消化吸收，胰脂肪酶是脂肪水解过程中的关键酶，可以催化天然底物油脂水解为甘油和脂肪酸，抑制其活性可以有效抑制脂肪的水解和吸收，从而达到控制和治疗肥胖的作用；如半合成的胰脂肪酶抑制剂类药物Orlistat已用于临床治疗肥胖，但治疗过程中伴随着腹胀、腹泻、脂肪性大便等副作用。

牛膝，为苋科植物牛膝(Achyranthes bidentata)的干燥根，是一种多年生草本植物，始载于《神农本草经》，是中国药典(国家药典委员会，2020)中记载的著名中药材之一，主要分布于河南、山西、河北、山东、四川等地。现在药理研究发现，牛膝的部分多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗骨质疏松的药理活性；然而多以药材总多糖药效研究为主，并没有对其进行分离纯化，总多糖的组成复杂，多糖含量低，难以体现牛膝果糖的药理作用。

发明内容

发明目的：本发明针对现有技术中总多糖的组成复杂，多糖含量低问题，提供一种化学组成清晰且高纯度的怀牛膝多糖，还涉及其制备方法及应用。

技术方案：本发明的所述的怀牛膝多糖，为均一多糖AB-1-1，由果糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖及阿拉伯糖组成，其中，果糖和葡萄糖的质量摩尔比为：86:12。

进一步的，所述多糖重均分子量为3.998×10³Da(±3.936％)，数均分子量为3.902×10³Da(±3.753％)，特性黏度值为4.34mL/g(±2.03％)；所述多糖由糖苷键连接，所述糖苷键型包括T-α-D-Glcp、→1)-β-D-Fruf-(2→、→2)-β-D-Fruf-(6→、→1，6)-β-D-Fruf-(2→及β-D-Fruf-(2→；其中四种果糖糖苷的比例为2.57:2.20:1:1.15。

本发明公开了怀牛膝多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)粉碎怀牛膝药材，无水乙醇回流提取，过滤，除去小分子杂质，取药渣烘干，将药渣进行回流提取，过滤合并滤液，减压浓缩加入无水乙醇沉淀，静置，除去上层澄清溶液收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，加水溶解多糖沉淀，采用Savage法反复脱蛋白，收集除去蛋白后的牛膝多糖溶液，冷冻干燥，得到精制牛膝多糖；

(2)称取步骤(1)所得精制牛膝多糖配制成饱和溶液，经DEAE-FF柱梯度洗脱进行初分离，采用硫酸-蒽酮法显色，紫外检测，以吸光度值为纵坐标，收集管数为横坐标绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线合并收集样品液，透析冻干，得到牛膝多糖粉末；

(3)取步骤(2)冻干后的牛膝多糖粉末，溶解并离心除去不溶性杂质，经SephadexG-25柱进行分离纯化，洗脱收集，采用硫酸-蒽酮法显色，紫外检测，以吸光度值为纵坐标，收集管数为横坐标绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线合并收集样品，冷冻干燥，得到所述怀牛膝多糖化合物。