[发明专利]一种OMT的单克隆抗体及其制备方法

说明书

本发明提供一种结合OMT的单克隆抗体及其制备方法，属于免疫领域。本发明提供的结合OMT的单克隆抗体可用于检测mRNA疫苗生产过程中残留的OMT。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种OMT的单克隆抗体。本发明还涉及该单克隆抗体的制备方法及其用途。

背景技术

mRNA是“信使核糖核酸”。作为“信使”，mRNA最主要的功能就是传递转录DNA信息，将生产各类蛋白质的模板指令传递出去。当人体细胞内加工蛋白质的“工厂”接收到这一指令，就会启动蛋白质合成过程。1987年底，Robert Malone将mRNA与脂肪滴混在一起，发现人体细胞可以吸收这些加入脂滴的mRNA，并且产生了蛋白质(Malone et al Sci.USA86，6077-6081(1989))。这一发现成为mRNA体内表达首次成功的尝试，也证明了mRNA疫苗的可行性。此后，经过30年的研究发展，重大的技术创新和研究投资使mRNA成为一种在疫苗开发和癌症治疗领域的重要工具。

mRNA疫苗在通过特定的递送系统进入人体后，利用人体的转录以及翻译系统生成具有特定免疫原性的蛋白质，这些蛋白质被抗原呈递细胞(APC)识别后，诱树突状细胞的成熟进而激活B细胞以及T细胞产生强烈的免疫应答，引发体液和细胞双重免疫反应，形成免疫记忆。而传统疫苗鲜少有报道可产生细胞免疫。从生产工艺来讲，mRNA疫苗具有生产工艺简单、开发速度快、不需要细胞培养、成本低等显著的优势。

在实际应用中，一方面，mRNA和细胞膜都带负电荷，所以需要递送系统有效包裹mRNA，使其不被会被存在于血液和组织中的RNA酶降解，另一方面，真核体系中的mRNA都具有帽子结构让mRNA在细胞内稳定表达，疫苗IVT过程中的mRNA需要这样的修饰，所以牛痘病毒加帽酶(Vaccine Capping Enzyme)可在mRNA疫苗中对外源抗原mRNA进行加帽，使其在细胞内稳定表达。生物体内的帽子结构有cap0，cap1，cap2三种形式，单细胞真核生物mRNA主要是cap0帽子，即第一个甲基出现在所有真核细胞的mRNA中，由鸟苷酸-7甲基转移酶催化；真核细胞中mRNA主要以cap1帽子结构为主，在第二个核苷酸的2’-OH位上加另一个甲基，由2’-O-甲基转移酶完成。牛痘病毒加帽酶由D12和D1两个亚基构成，D1亚基具有RNA三磷酸酶和鸟苷转移酶活性，D12亚基具有鸟嘌呤甲基转移酶活性，所以牛痘病毒加帽酶能够在mRNA的5’端添加cap0帽子，效率达到100％，并且方向正确，再使用甲基转移酶(OMT)处理即可得到cap1帽子，并且方向正确。

检测OMT的残留量也是重要环节，因此，开发出一个高灵敏性、高特异性的检测OMT残留的单克隆抗体迫在眉睫。

发明内容

本发明目的在于提供特异性结合OMT(甲基转移酶)的分离的抗体或其抗原结合片段，用于检测OMT的残留量。

本发明的第一方面，提供一种分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：

(a)重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：

SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链互补决定区1(HCDR1)，SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的HCDR2，和SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的HCDR3；以及

(b)轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：

SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的轻链互补决定区1(LCDR1)，SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的LCDR2，和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的LCDR3；

其中所述抗体或其抗原结合片段能够特异性地结合至OMT，优选的所述OMT包含SEQ ID NO:11所示氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH包含SEQID NO:7所示氨基酸序列，并且所述VL包含SEQ ID NO:8所示氨基酸序列。