[发明专利]一种重组人源化胶原蛋白及其纯化和内毒素去除方法

权利要求书

1.一种重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将重组人源化胶原蛋白发酵液在搅拌下加热至80～85℃并保持20～30min；

(2)将步骤(1)处理后发酵液经高速离心机离心固液分离，去除菌体及高温变性杂蛋白，收集上清液，所得上清液用0.22μm中空纤维膜进行过滤澄清，滤出液用碱试剂调节pH值至5.5～6.0，用纯化水调节溶液电导率至6.5～7mS/cm；

(3)将步骤(2)所得的滤出液经复合型弱阳离子交换层析柱层析纯化，洗脱过程采用流动相B1洗脱内毒素及杂质，流动相B2洗脱重组人源化胶原蛋白，洗脱液经冷冻干燥即可得重组人源化胶原蛋白；

所述流动相B1为pH值7.0～7.5的磷酸盐缓冲液；所述流动相B2为用碱试剂调节pH值至8.0～8.5的注射用水。

2.根据权利要求1所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液采用注射水配制。

3.根据权利要求1或2所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为5～15mmol。

4.根据权利要求1所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，步骤(2)或步骤(3)中，所述碱试剂为氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化镁。

5.根据权利要求1所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，步骤(3)中，所述复合型弱阳离子交换层析柱为采用流动相A平衡后的复合型弱阳离子交换层析柱。

6.根据权利要求5所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，所述流动相A为pH值5.5～6.5的磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求6所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为5～15mmol。

8.根据权利要求1所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，所述复合型弱阳离子交换层析柱的填料为MMC Bestarose FF。

9.根据权利要求8所述的重组人源化胶原蛋白的纯化和内毒素去除方法，其特征在于，所述MMC Bestarose FF填料的平均粒径为90μm。

10.一种重组人源化胶原蛋白，其特征在于，采用权利要求1-9任一项所述的纯化和内毒素去除方法制备而得，所述重组人源化胶原蛋白的内毒素含量低于0.05EU/mg。