[发明专利]一种高效递送siRNA的载药纳米粒及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种高效递送siRNA的载药纳米粒及其制备方法与应用，该siRNA载药纳米粒由Znsupgt;2+/supgt;、槲皮素、siRNA和苯硼酸‑透明质酸共轭物通过自组装形成，Znsupgt;2+/supgt;与槲皮素络合后包载siRNA形成载药内核，再由苯硼酸‑透明质酸共轭物包裹载药内核组装成高效递送siRNA的载药纳米粒。本发明的载药纳米粒通过Znsupgt;2+/supgt;与槲皮素及siRNA的配位络合作用形成一种新型“以药载药”内核，并以苯硼酸基团修饰的HA作为外壳，构建双重酸敏感型联合载药纳米粒，可以实现靶向SIRT1的基因药物和小分子药物的共递送和协同治疗；同时该载药纳米粒包含磷酸锌配位键和苯硼酸酯键双重酸敏官能团，在胞内溶酶体酸性环境中迅速断裂，使载体有效解散，并诱发溶酶体内渗透压升高以促进药物的高效递送与释放。

技术领域

本发明涉及纳米材料和纳米生物医药领域，具体涉及一种高效递送siRNA的载药纳米粒及其制备方法与应用。

背景技术

膀胱癌是常见的肿瘤恶性。据2018年美国癌症统计数据显示，仅在美国其新发病例大约7.7万，且发病率呈上升趋势。膀胱癌高昂的治疗费用及其高死亡率已成为全球严重的社会问题。辅助化疗可以降低癌症复发率，预防或延缓癌症的进展，然而，常规的化疗手段缺乏靶向性，所产生的严重的毒副作用极大的降低了患者顺应性和生存质量；相比而言，联合用药可降低明显降低单一药物的给药剂量，减少毒副作用的发生，已成为抗肿瘤化疗的研究热点。

我们研究发现，Sirtuin 1(去乙酰化酶1,SIRT1)在膀胱癌细胞中过表达，Sirtuin1与葡萄糖转运关键蛋白GLUT1表达正向相关，且Sirtuin 1的过表达可促进GLUT1蛋白的表达，进一步诱导肿瘤的糖代谢活跃而促肿瘤增殖；与之相反，SIRT1抑制剂则可降低GLUT1的表达，进而降低肿瘤细胞的糖摄取，诱导细胞凋亡。为此，我们创新性地提出SIRT1与肿瘤相互作用的新机制，即通过干扰GLUT1表达，实现对肿瘤的调控。基因药物是分子靶向治疗研究的一个重要方向，其可在基因水平抑制相关蛋白的表达，从而实现靶点的沉默效应。与传统化疗药物相比，基因药物可特异性抑制肿瘤而无明显毒副反应，然而，siRNA在体内稳定性、靶向性及细胞摄能力差，其在体内的输送需依赖递送载体。

槲皮素(Quercetin)是从豆科植物有效成分芦丁中提取的疏水性黄酮类化合物，属于酪氨酸激酶抑制剂(RTKs inhibitors)。研究表明，槲皮素可通过表皮生长因子受体(EGFR)介导的机制抑制基质金属蛋白酶9(MMP9)的分泌，从而限制肿瘤细胞的侵袭能力，抑制Twist基因表达从而诱导肿瘤细胞凋亡，显著抑制癌细胞的增殖，

专利CN112353950A公开了一种“以药载药”的siRNA纳米递送系统，利用槲皮素与siRNA通过π-π键、亲疏水作用和氢键作用自组装形成纳米药物，以期实现槲皮素与siRNA协同作用于肿瘤细胞，但是所述siRNA纳米递送系统存在明显缺陷：1)仅通过槲皮素包载siRNA的稳定性不高，在人体转运过程中容易裂解，递送效率不高；2)槲皮素与siRNA形成的纳米系统在被细胞摄入后，细胞中的溶酶体能够清除外源性大分子物质，同时溶酶体中富含的核酸酶对于进入细胞内的siRNA具有高效消化分解作用，会导致该纳米递送系统难以突破细胞自身的防御属性，也就难以进一步作用于抑制肿瘤细胞；3)该纳米递送系统不具有肿瘤靶向功能，不能实现对于肿瘤细胞的靶向作用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提出了一种高效递送siRNA的载药纳米粒及其制备方法与应用，其目的是构建一种高效递送siRNA的纳米粒子，既可以在人体中实现稳定转运，又能靶向目标肿瘤细胞，并且还可以突破细胞的溶酶体防御体系，最终实现对于肿瘤细胞的联合抑制，在膀胱癌基因药物治疗中具有良好的应用前景。