[发明专利]艾塞那肽的前处理及其得到的His氨基酸洗脱液中异构体的检测方法

权利要求书

1.一种艾塞那肽的前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

将待测艾塞那肽进行水解，得到水解体系；

将所述水解体系进行氨基酸分离，得到His氨基酸洗脱液；

所述氨基酸分离为高效液相色谱分离；

所述高效液相色谱分离的参数包括：

色谱柱：Comixshell CARP 2.7μ150*4.6mm；

流动相体系包括流动相A和流动相B；

所述流动相A：10mL乙腈+0.1mL 85wt％磷酸+490mL水；

所述流动相B：50mL乙腈+0.4mL 85wt％磷酸+150mL水；

梯度洗脱为：

0min：流动相A的体积分数为100％；

0～20min：流动相A的体积分数由100％匀速变为0％；

20～20.1min：流动相A的体积分数由0％匀速变为100％；

20.1～35％：流动相A的体积分数维持100％。

2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述流动相体系的流速为0.8～1.2mL/min。

3.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述色谱柱的温度为20～35℃。

4.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述高效液相色谱分离的参数还包括：检测波长为200nm。

5.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述水解的试剂包括盐酸或氘代盐酸。

6.根据权利要求1或5所述的前处理方法，其特征在于，所述水解的体系中，水解的试剂的浓度为6mol/L，待测艾塞那肽的浓度为3mg/mL。

7.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述水解的温度为105～120℃，时间为4～12h。

8.权利要求1～7任一项所述的前处理方法得到的His氨基酸洗脱液中异构体的检测方法，包括以下步骤：

对所述His氨基酸洗脱液进行高效液相色谱手性分析；

所述高效液相色谱手性分析的参数包括：

色谱柱：CROWNPAK CR(+)150*4.0mm 5μm；

流动相：pH值为1.0的高氯酸水溶液。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱手性分析的参数还包括：所述流动相的流速为0.2～0.3mL/min；所述色谱柱的温度为2～10℃；检测波长为195～205nm；进样量为10μL。

10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，对所述His氨基酸洗脱液进行高效液相色谱手性分析前，还包括：去除所述His氨基酸洗脱液中的溶剂后复溶。