[发明专利]艾塞那肽的前处理及其得到的His氨基酸洗脱液中异构体的检测方法

说明书

本发明属于分析化学技术领域，提供了艾塞那肽的前处理及其得到的His氨基酸洗脱液中异构体的检测方法。本发明将待测艾塞那肽进行水解和氨基酸分离，收集His氨基酸洗脱液；利用高效液相色谱对所述His氨基酸洗脱液进行手性分析；所述高效液相色谱的条件包括：色谱柱：CROWNPAKCR(+)150*4.0mm 5μm；流动相：pH值为1.0的高氯酸水溶液。本发明先将艾塞那肽进行水解，得到氨基酸混合物，再利用高效液相色谱分离将氨基酸混合物中的His氨基酸进行分离，得到His氨基酸洗脱液，前处理方法操作简单；再通过控制色谱柱类型和流动相组成，实现了His氨基酸中不同异构体的分离和测定，且数据重现性好。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及艾塞那肽的前处理及其得到的His氨基酸洗脱液中异构体的检测方法。

背景技术

艾塞那肽(Exenatide)是胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，用于改善II型糖尿病患者的血糖控制，适用于单用二甲双胍、磺酰脲类以及二甲双胍合用磺酰脲类，血糖仍控制不佳的患者。艾塞那肽能够有效保护胰岛β细胞功能，持久有效地控制血糖，合理减轻患者体重，改善心血管危险因素、提高胰岛素敏感性。艾塞那肽在治疗II型糖尿病(T2DM)中有较大的优势。

艾塞那肽的合成过程暴露在偏碱性环境下，部分拼接的氨基酸会在该条件下由L构型转化为D构型，故需对艾塞那肽的异构体进行定量检验。艾塞那肽的异构体包括L-His¹艾塞那肽和D-His¹艾塞那肽。美国药典收载了艾塞那肽的异构体D-His¹艾塞那肽检测的方法，包括以下步骤：先水解，再进行衍生化；再采用GC-MS进行分离定量检测。但是，前处理的衍生化，操作繁琐不易掌握。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供艾塞那肽的前处理及其得到的His氨基酸洗脱液中异构体的检测方法。本发明提供的前处理方法操作简单。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种艾塞那肽的前处理方法，包括以下步骤：

将待测艾塞那肽进行水解，得到水解体系；

将所述水解体系进行氨基酸分离，得到His氨基酸洗脱液；

所述氨基酸分离为高效液相色谱分离；

所述高效液相色谱分离的参数包括：

色谱柱：Comixshell CARP 2.7μ150*4.6mm；

流动相体系包括流动相A和流动相B；

所述流动相A：10mL乙腈+0.1mL 85wt％磷酸+490mL水；

所述流动相B：50mL乙腈+0.4mL 85wt％磷酸+150mL水；

梯度洗脱为：

0min：流动相A的体积分数为100％；

0～20min：流动相A的体积分数由100％匀速变为0％；

20～20.1min：流动相A的体积分数由0％匀速变为100％；

20.1～35％：流动相A的体积分数维持100％。

优选地，所述流动相体系的流速为0.8～1.2mL/min。

优选地，所述色谱柱的温度为20～35℃。

优选地，所述高效液相色谱分离的参数还包括：检测波长为200nm。

优选地，所述水解的试剂包括盐酸或氘代盐酸。