[发明专利]还原胺化酶及其制法和应用

权利要求书

1.一种体外还原胺化方法，其特征在于，包括步骤：

(i)在还原胺化酶AcRedAm存在下，使得(S1)酮底物或醛底物与(S2)胺底物进行还原胺化反应。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

在还原胺化酶AcRedAm存在下，使式Z1所示的酮底物或醛底物和式Z2所示的胺底物进行还原胺化反应，从而形成式I所示的还原胺化产物：

其中

R1为取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基、取代或未取代的(C1-C6亚烃基)-苯基，其中所述的取代指出一个或多个H原子被选自下组的取代基所取代：C1-C3烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6环烷基、卤素、或其组合；

R2为H或甲基；

或者R1和R2与相连的C原子共同构成取代或未取代的4-10元的杂环；

R3为H、取代或未取代的C1-C8烷基，取代或未取代的C2-C8烯基、取代或未取代的C2-C8炔基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的6-10芳基、取代或未取代的(C1-C6亚烃基)-苯基、取代或未取代的(C3-C6亚环烷基)-苯基，其中，所述的取代指出一个或多个H原子被选自下组的取代基所取代：C1-C3烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C6环烷基、卤素、或其组合。

3.一种分离的或纯化的还原胺化酶，其特征在于，所述的还原胺化酶具有SEQ ID No:1所示的序列，并且具有至少1个氨基酸突变。

4.如权利要求3所述的还原胺化酶，其特征在于，所述的突变型的还原胺化酶在选自下组的位点具有突变：SEQ ID No:1所示序列的第207位、第214位、237位或其组合。

5.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求3所述的还原胺化酶。

6.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求5所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求6所述的载体，或其基因组中整合权利要求5所述的多核苷酸。

8.一种权利要求3所述的还原胺化酶或野生型还原胺化酶AcRedAm的用途，其特征在于，它被用于催化还原胺化反应，或被用于制备催化还原胺化反应的催化制剂。

9.一种还原胺化酶体外合成雷沙吉兰的方法，其特征在于，包括步骤：

在权利要求3所述的还原胺化酶或野生型还原胺化酶AcRedAm存在下，催化1-茚酮和炔丙胺进行反应，从而生成雷沙吉兰。

10.一种进行还原胺化反应的反应体系，其特征在于，所述的反应体系包括：

(S0)权利要求3所述的还原胺化酶或野生型还原胺化酶AcRedAm；

(S1)酮底物或醛底物；

(S2)胺底物；和

(S3)任选的NADPH或NADPH再生模块。