[发明专利]一种结核分枝杆菌串联DNA疫苗W545及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种结核分枝杆菌串联DNA疫苗W545及其制备方法与应用。本发明通过基因工程技术将Ag85A蛋白和Ag85B蛋白抗原表位基因，以及Rv1419、Rv3407和Rv2628c的表位基因串联融合在一起，并连接到真核表达载体pVAX1上，构建得到一种多抗原免疫优势表位的新型结核杆菌DNA疫苗W545。本发明所制备的结核分枝杆菌串联DNA疫苗W545，可显著增强小鼠特异的细胞免疫功能，主要刺激Th1型的免疫反应，治疗小鼠结核模型可使其脏器组织病变范围显著减少，病变减轻，可用于制备预防或治疗结核病的药物或疫苗中。

技术领域

本发明涉及一种结核分枝杆菌特异性串联DNA疫苗W545及其制备方法与应用，具体涉及一种应用基因工程技术制备的新型结核分枝杆菌特异性串联DNA疫苗W545及其应用，属于结核病医学免疫学预防和治疗技术领域。

背景技术

结核病(Tuberculosis，TB)一直是人们关注的一个全球性健康问题。世界卫生组织(WHO)2020年全球结核病报告指出，在2019年，全球有1000万结核病新发病例，120万死亡病例。全世界大概有1/3的人存在结核分枝杆菌(M.tb)潜伏感染，其中5％～10％的感染者最终会发展为TB患者。我国的结核病人数位居世界第三。我国约有三分之一人口感染了结核菌，其中5％可能早期发病，5％在其一生中的任何时候可能发病，而且耐药结核病人多。因此，结核感染人群的预防治疗可有效减少肺结核的发病率，结核病患者的早期诊断、有效化疗将控制结核病及结核菌的传播。对处于不同阶段的M.tb感染进行有效防治至关重要。

结核病是一种在感染、免疫、预防和治疗等方面充满矛盾和挑战的慢性呼吸道传染病，合理、规律的化疗一般在1～2个月内即可杀死病灶内绝大多数结核菌，但仍有少量菌残留，尤其是寄生于巨噬细胞内的结核菌不易被杀死，需继续治疗3～4个月，甚至更长时间。由于耐药菌株的传播，耐药结核病(尤其是耐多药结核病和广泛耐药结核病)的治疗是我国未来结核病控制重点关注的问题。目前在临床使用的十几种抗结核药物已数十年，初治结核病化疗方案通常需3-4个药物治疗6个月以上，而复治或耐药结核病通常需5-6种药物治疗1年以上，再加上药物的毒副作用，二线药物价格昂贵，部分病人难以坚持。由于研制新的抗结核药物，不仅投入大，周期长，比新的治疗性疫苗的研制更困难，而且新药也可能很快产生耐药性。而疫苗治疗在几个月中只注射几针，远比每天服药方便，且副作用较少，费用低。抗结核免疫主要是细胞介导的免疫反应，疫苗治疗可以通过调节或选择性地诱导结核病患者免疫系统蕴藏的潜力，来达到治疗疾病的目的。因此，近年来通过免疫调节治疗结核病成为研究的热点之一，治疗性疫苗的研究与开发成为一个十分重要的研究方向。