[发明专利]白灵片中芍药苷含量的HPLC检测方法

说明书

本发明公开了一种白灵片中芍药苷含量的HPLC检测方法，包括，制备对照品溶液和供试品溶液，分别将对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪测定获得色谱图，采用外标法计算供试品中芍药苷含量；其中采用液相色谱仪测定获得色谱图的色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈‑水为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于300。本发明对所建立的HPLC检测方法进行方法验证，结果表明该检测方法操作简便，结果准确，专属性高，重现性良好；在9.89～98.91μg/ml范围内具有良好的线性关系，平均回收率102.50％，RSD＝1.66％，可用于白灵片质量控制。

技术领域

本发明涉及白灵片中有效成分含量的检测方法，尤其涉及白灵片中芍药苷含量的HPLC检测方法，属于白灵片中有效成分含量的检测领域。

背景技术

白灵片为当归、三七、红花、牡丹皮、桃仁、防风、苍术、白芷、马齿苋、赤芍、黄芪11种药材组成，具有活血化瘀，增加光敏作用，用于白癜风。本品收载于《部颁标准》第五册，标准中只有常规检查和一般的薄层鉴别，未建立含量测定标准。

芍药苷是白灵片中的主要有效成分之一，对其含量提供一种结果准确、专属性高、重现性良好的检测方法，有利于白灵片的质量控制并提高该品种有效监控指标。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种白灵片中芍药苷含量的HPLC检测方法；

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种白灵片中芍药苷含量的HPLC检测方法，包括，制备对照品溶液和供试品溶液，分别将对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪测定获得色谱图，采用外标法计算供试品中芍药苷含量；其中，采用液相色谱仪测定获得色谱图的色谱条件包括：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于300；

其中，采用外标法计算供试品中芍药苷含量的方法包括：以对照品溶液中芍药苷浓度与峰面积为对照，按照公式C_x＝C_R×A_x/A_R，计算供试品中芍药苷的含量；式中C_R为对照品溶液浓度，A_R为对照品芍药苷的色谱峰面积，A_x为供试品中芍药苷的色谱峰面积。

作为本发明一种优选的具体实施方案，所述的采用液相色谱仪测定获得色谱图的色谱条件还包括：进样量为5ul，柱温为30℃。

作为本发明一种优选的具体实施方案，所述的对照品溶液的制备方法包括：将芍药苷对照品中加入甲醇，即得对照品溶液；优选的，将芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg芍药苷对照品的溶液，即得对照品溶液。

作为本发明一种优选的具体实施方案，所述的供试品溶液的制备方法包括：白灵片除去包衣，研细，加入70％乙醇超声处理，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取过滤液，即得供试品溶液；优选的，取白灵片10片，除去包衣，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率150W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取过滤液，即得供试品溶液；优选的，所述超声处理的参数是150W/50HZ。

作为本发明一种优选的具体实施方案，所述的检测方法还包括分别制备缺赤芍阴性对照溶液、缺牡丹皮阴性对照溶液以及同时缺赤芍和牡丹皮双阴性对照溶液；

其中，所述缺赤芍阴性对照溶液的制备方法包括，按照处方组成及生产工艺制得缺赤芍的阴性样品，按权利要求5或6所述的供试品溶液制备法制得缺赤芍阴性对照溶液；